Ação da melatonina sobre a apoptose e fator de crescimento endotelial vascular no córtex da adrenal de ratas pinealectomizadas / Melatonin action in apoptosis and vascular endothelial growth factor in adrenal cortex of pinealectomized female rats

RESUMO

OBJETIVO: avaliar os efeitos da melatonina na apoptose e atividade celular no córtex da adrenal de ratas pinealectomizadas. MÉTODOS: foram utilizadas 40 ratas adultas, divididas randomicamente em 4 grupos com 10 animais cada GCont - sem intervenção cirúrgica e com ministração do veículo; GSham - sem retirar a pineal com ministração do veículo; GExpV - pinealectomizado e tratado com veículo; GExpM - pinealectomizado e tratado com melatonina (10 µg/animal, por dia) durante a noite. Após 60 dias de tratamento, todos os animais foram submetidos à eutanásia, as adrenais retiradas, fixadas em formol a 10 por cento e processadas para inclusão em parafina. Nos cortes histológicos com 5 µm de espessura, foram realizados métodos imunoistoquímicos para detecção da apoptose (Caspase-3-clivada) e da atividade celular (fator de crescimento endotelial vascular, VEGF-A). Para avaliar a percentagem de apoptose foram contadas as células reativas em 1.000 células de cada zona da região cortical da adrenal em cada animal; já o VEGF-A foi expresso em escores. Os dados quantitativos foram analisados pela análise de variância (ANOVA) e pelo teste de comparações múltiplas de Tukey-Kramer (p<0,05). RESULTADOS: na avaliação do índice apoptótico, não foram encontradas diferenças significantes na zona glomerulosa entre os vários grupos estudados. Na zona fasciculada (GExpV=15,51±3,12*, p<0,05) e na reticulada (GExpV=8,11±1,90*, p<0,05) houve redução no índice apoptótico no grupo GExpV em relação aos demais grupos de estudo. Na reatividade ao VEGF-A, houve maior positividade, indicando maior atividade celular na zona na fasciculada do GExpV em relação aos outros grupos. CONCLUSÕES: a melatonina atua na região cortical da adrenal, em especial nas zonas fasciculada e reticulada, que estão relacionadas com a produção de esteroides sexuais.

ABSTRACT

PURPOSE: to evaluate the reactivity of VEGF-A and cleaved caspase-3 in the adrenal gland cortex of female pinealectomized rats treated with melatonin. METHODS: forty adult female rats were divided into 4 groups (G) of 10 animals GI - no surgical intervention, with vehicle administration; GII - sham pinealectomized with vehicle administration; GIII - pinealectomized with vehicle administration; GIV - pinealectomized with melatonin administration (10 µg/animal) during the night. After 60 days of treatment, all animals were anesthetized, and the adrenal glands were removed and fixed in 10 percent formaldehyde (phosphate buffered) for histological processing and paraffin embedding. Sections (5 µm thick) were collected on silanized slides and submitted to imunnohistochemical methods for the detection of cleaved caspase-3 (apoptosis) and of vascular endothelial growth factor (VEGF-A) in the adrenal cortex. The data obtained were submitted to analysis of variance (ANOVA) complemented by the Tukey-Kramer test (p<0.05). RESULTS: reactivity to cleaved Caspase-3 was noted in the zona glomerulosa of the adrenal glands in all studied groups. There were no significant differences in the zona glomerulosa; however, the zona fasciculata (15.51±3.12*, p<0.05) and the zona reticularis (8.11±1.90*, p<0.05) presented the smallest percentage of apoptosis in the pinealectomized group (GIII). The reactivity to the VEGF-A was stronger in the zona glomerulosa and weaker in the zona reticularis in all groups. We found a stronger VEGF-A reactivity in the zona fasciculata in the pinealectomized group (GIII). CONCLUSIONS: the pineal gland affects the arrangement of the zona glomerulosa and reticularis of the adrenal glands, which are related to the production of sex hormones.