Análise da expressão do Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) e seu efeito na produção de óxido nítrico em macrófagos estimulados com micobactérias / Expression Analysis of Growth Factor Insulin-like-I (IGF-I) and its effect on nitric oxide production in macrophages stimulated with mycobacterial

RESUMO

Fagócitos mononucleares são células alvo para micobactérias patogênicas como M. tuberculosis e M. leprae. Essas micobactérias têm a capacidade de modular os mecanismos microbicidas dos macrófagos, sobreviver e replicar nessas células. Contudo o mecanismo molecular envolvido nesta desativação não é totalmente compreendido. Dados do nosso laboratório têm demonstrado que o M. leprae é capaz de induzir a expressão do fator de crescimento semelhante a insulina I um hormônio com efeito anti-apoptotico e com atividade de proliferação – em Células de Schwann humanas. Recentemente, foi relatado que IGF-I é capaz de inibir a expressão da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e consequentemente a produção de óxido nítrico em macrófagos induzido por Leishimania amazonensis. Baseado nestes dados, nós temos investigado o envolvimento do IGF-I na desativação dos macrófagos observada na infecção micobacteriana. Com este propósito, macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7 foram estimulados ou não com M. leprae e a expressão de IGF-I foi monitorada através de RT-PCR quantitativo e ensaio imunoenzimático específico, ELISA. Duas outras espécies de micobactérias, M bovis BCG e M. smegmatis, respectivamente, uma cepa atenuada de M. bovis e uma micobactéria não-patogênica, foram testadas para comparação. O estímulo com M. leprae ou BCG, em contraste com M. smegmatis, regulou positivamente a expressão de RNAm para IGF-I e aumento significantemente os níveis da proteína quando comparado com a cultura controle. Além disso, nós também investigamos o efeito do IGF-I na produção de NO e na expressão de iNOS induzida por micobactérias em macrófagos RAW 264.7. A produção de NO foi monitorada pela determinação da concentração de nitrito no sobrenadante em meio de cultura, utilizando reagente de Griess e a expressão de iNOS monitorada por Western Blot. M. leprae foi um fraco estimulo para indução de iNOS. Em contraste, BCG e M. smegmatis induziram a expressão e, como consequência, uma significativa produção de NO em macrófagos RAW. Interessantemente, células pré-tratadas com IGF-I mostraram uma significativa redução na produção de nitrito após a estímulo com micobactérias, o que correlacionou com uma regulação negativa da expressão de iNOS. Além disso, IGF-I foi capaz de reduzir parcialmente a produção de NO induzida por IFN-gama recombinantes. Esses resultados sugerem que o IFG-I pode contribuir para a persistência micobacteriana no hospedeiro, modulando negativamente a resposta imune inata duração a infecção.