TNF alfa modifica la respuesta de la frecuencia de batido ciliar a la carga viscosa, asociado a alteraciones en el calcio intracelular en células ciliadas respiratorias humanas / TNF alpha modifies ciliary beat frequency in response to viscous overload, associated to changes in intracellular calcium in human respiratory ciliated cells

RESUMEN

Introducción: Secreciones sinonasales patológicas y elevados niveles de factor de necrosis tumoral alfa (TNF alfa) se han encontrado en mucosa sin usal de pacientes con sinusitis crónica. Las células ciliadas respiratorias tienen una reserva funcional que les permite autorregular su frecuencia de batido ciliar (FBC) en respuesta a cambios en la viscosidad, modificando los niveles de calcio intraacelular [Ca+²]ic. Objetivo: Nuestro objetivo es determinóar si TNFalfa afecta el mecanismo de autorregulación y la homeostasis del calcio intraacelular frente a cambios en la viscosidad. Material y método: Cultivos primarios de explantes de tejido adenoideo. Registro de FBC mediante microfotodensitometría. Cultivos tratados con TNFalfa (10 ng/ml) o control durante 24 y 48 horas. Se in crementó la viscosidad agregando dextrano 500 al 10 por ciento y 20 por ciento. Se midió [Ca+²]ic en células cargadas con Fura 2AM. Resultados: El tratamiento con TNFalfa por 48 horas produjo una significativa disminución de la FBC a baja viscosidad, aumento significativo de [Ca+²]ic y caída mayor de FBC en cultivos tratados con tapsigargina (bloqueador bomba calcio-ATPasa retículo). in o se encontró diferencia a alta viscosidad. Conclusión: Después de 48 horas de exposición a TNFalfa se observa un efecto negativo en el mecanismo de adaptación de las células ciliadas a un medio con baja viscosidad, probablemente secundario a cambios en la homeostasis del [Ca+²]ic.

ABSTRACT

Introduction: Pathologic sinonasal secretions and elevated levels of tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) have been in oted in sin us mucosa ofpatients with chronic sinusitis. Respiratory ciliated cells have a functional reserve that allows them to autoregulate their ciliary beat in response to the changesin viscosity, modify in g intraacellular calcium levels [Ca+²]ic. Aim: Our goal was to determinate if TNFalpha affect this autoregulation to viscosity and calcium homeostasis. Material and Method: Primary cultures from adenoid tissue expiants. Ciliary beat frequency (CBF) was recorded usin g microphotodensitometry Cultures viere treated with TNF alpha (10 ng/ml) or control during 24 and 48 hours. Viscosity was increased by add in g dextran 500 10 percent and 20 percent. [Ca+²]ic was determined in cells loaded with Fura-2AM. Results: 48 hours treatment with TNFalpha produced a significant decrease in CBF at low viscosity significant increase in [Ca+²]ic and greater decrese in CBF in cultures treated with thapsigargin (endoplasmic calcium-ATPase pump blocker). Conclusions: After 48 hours of exposure to TNF alpha a negative effect in the adaptation mechanism to a low viscous media is observed in ciliated cells, probably secondary to changesin homeostasis of [Ca+²]ic.