Estudio de la inserción de ADNk de Trypanosoma cruzi en el genoma de pacientes con enfermedad de Chagas / Study of Trypanosoma cruzi’s kDNA insertion into the genome of chagasic patients

RESUMEN

La enfermedad de Chagas afecta cerca de 20 millones de personas y es una patología restringida al continente americano. Esta enfermedad de carácter crónico es causada por el parásito Trypanosoma cruzi del cual, en la actualidad se han definido dos poblaciones: Trypanosoma cruzi I y Trypanosoma cruzi II, con características particulares relacionadas con la distribución geográfica y el tipo de manifestaciones clínicas. Objetivo: Este estudio consistió en determinar si ocurre inserción del kDNA del Trypanosoma cruzi I en el genoma de pacientes chagásicos del área endémica de Santander (Colombia) a partir de muestras de ADN extraído de sangre periférica. Metodología: Se tuvieron en cuenta 130 muestras provenientes de pacientes sintomáticos, así como 50 muestras provenientes de pacientes asintomáticos, las cuales fueron analizadas mediante la técnica de PCR con los pares de cebadores Tcz1/Tcz2 y S35/S36 con el fin de identificar la presencia del parásito en dichas muestras. Posteriormente se tomaron las muestras que resultaron positivas de la PCR S35/S36, para realizar una doble digestión con las enzimas de restricción EcoRI y BamHI, luego se realizó la separación de los fragmentos de ADN obtenidos en un gel de agarosa, y posteriormente fueron transferidos a una membrana de nylon e hibridados con un oligonucleótido sintético marcado enzimáticamente con digoxigenina. Conclusión: Ninguna de las muestras que se tuvieron en cuenta en este estudio hibridó con dicho oligonucleótido, es decir ninguna de estas muestras posee aquella secuencia del gen del parásito insertado en el genoma del paciente chagásico.

ABSTRACT

Chagas disease affects nearly 20 million people and it is a pathology restricted to the American continent. This disease has a chronic character and it is caused by the parasite Trypanosoma cruzi, which is actually classified in two major lineages: Trypanosoma cruzi I and Trypanosoma cruzi II. These lineages have particular features related with geographic distribution and clinical manifestations. Objective: This study consisted in determining if the kDNA of T. cruzi I is inserted into the genome of chagasic patients from the endemic area of Santander (Colombia), specifically in DNA extracted from samples of peripherical blood. Methodology: One hundred and thirty samples from symptomatic patients and 50 samples from asymptomatic patients were considered for this study; all of them were analyzed by PCR technique with primers Tcz1/Tcz2 and S35/S36 with the purpose of identifying the parasite’s presence in these samples. The samples that resulted positive of the PCR S35/S36 were double digested with EcoRI and BamHI restriction enzymes, the DNA fragments obtained were separated in an agarose gel, transferred to a nylon membrane and hybridized with a digoxigenin marked synthetic oligonucleotide. Conclusions: None of the samples of this study hybridized with this oligonucleotide, which means that none of them possess this parasite’s gene sequence inserted in the genome of the chagasic patient.