Regulação e localização de RNA mensageiro durante miogênese de células musculares cardíacas e após infecção pelo Trypanosoma cruzi / Regulation and localization of messenger RNA during myogenesis of cardiac muscle cells after infection with Trypanosoma cruzi

RESUMO

Um sistema experimental in vitro foi utilizado para estudar eventos biológicos e moleculares envolvidos na interação Trypanosoma cruzi – cardiomiócitos. As análises de organização do citoesqueleto e de regulação e localização intracelular de RNA mensageiros (RNAm) forneceram elementos para um melhore entendimento do efeito citopatológico induzido nas celular do miocárdio pelo T.c cruzi. O padrão de expressão e de distribuição de componentes estruturais de células musculares foi analisado durante a miogênese cardíaca. Estudos ultra-estruturais e imunofluorescentes revelaram mudanças na organização do citoesqueleto em cardiomiócitos infectados. Um dos eventos mais marcantes foi a quebra das miofibrilas na região onde o parasita intracelular encontrava-se localizado. Microtúbulos e filamentos de desmina também encontravam-se destruídos com a progressão da infecção (48 e 72 h). Avaliamos se estas mudanças no citoesqueleto afetariam a regulação de RNA mensageiros de actina. Nossos dados revelaram uma expressão temporal e seqüencial de RNA mensageiros de isoformas de actina durante a miogênses cardíaca em células normais ocorreu um aumento nos níveis de RNAm de a-actina cardíaca concomitante com uma diminuição nos níveis de RNAm de beta e gama actina durante a diferenciação de células musculares. A localização intracelular dos RNAm de actina também foi distinta. Mioblastos apresentaram o sinal de RNAm de beta-actina na periferia da célula, enquanto o RNAm de a-actina cardíaca após 72 h de infecção. Em contraste, o RNAm de beta menos actina aumentou 79 porcento após 48 h de infecção. Além disso, a infecção pelo T. cruzi delocalizou o RNAm de beta menos actina da periferia para a região perinuclear. Esta diminuição de RNAm de alfa menos actina cardíaca e aumento de beta menosactina sugere uma reativação do programa genético de células não musculares sob condições patológicas. A análise da distribuição espacial de poli (A) mais RNA e sua quantidade relativa em cardiomiócitos normais e infectados pelo T. cruzi revelaram porcento de redução no conteúdo citoplasmático de células infectadas, a qual foiconcomitante com a proliferação dos parasitas intracelulares.mudanças nos níveis de poli (A)mais RNA durante o ciclo intracelular do parasita também foram observadas. Um aumento no conteúdo de poli (A)mais RNA em formas amastigotas e subseqüente diminuição após diferenciação a formas tripomastigotas indicaram um aumento progressivo no conteúdo de RNA durante a proliferação do parasita intracelular. Além disso, investigamos a distribuição espacial do RNAm de actina e seu produto protéico no T. cruzi. Embora o RNAm de actina tenha sido visualizado no núcleo e citoplasma do parasita, não foi possível detectar a proteína (actina) usando métodos bioquímicos e imunofluorescentes.