Influência da vitamina D na atividade osteoclástica em um modelo de cultura de órgãos ósseos / Influence of vitamin D on osteoclastic activity in a bone organ culture model

RESUMO

INTRODUÇÃO: A remodelação óssea é regulada por várias citocinas e hormônios, como a vitamina D3. Essa vitamina, em particular, regula positiva e negativamente a expressão do ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa-B (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG), respectivamente, e é usada como um indutor da formação de osteoclastos in vitro. OBJETIVO: Estudar o efeito da vitamina D (VitD) sobre a atividade osteoclástica em cultura de calvárias. MATERIAL E MÉTODO: Fragmentos de calvária de camundongos foram cultivados com meio básico (controle) ou com meio contendo VitD (10 nM baixa dose; 100 nM alta dose). Após os intervalos de 24, 48 e 72 horas, o meio de cultura foi coletado para dosagem de cálcio e os fragmentos foram fixados para análise em microscopia confocal. RESULTADOS: Observou-se que a adição de VitD nas duas dosagens promoveu aumento nos níveis de cálcio no meio, porém só foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre alta e baixa dose no intervalo de 24 horas. Na microscopia, foram observadas áreas de desmineralização mais amplas nos fragmentos de calvária cultivados com altas doses de VitD. CONCLUSÃO: A VitD promove aumento da atividade osteoclástica in vitro, de modo concentração-efeito.

ABSTRACT

INTRODUCTION: Bone remodeling is controlled by various cytokines and hormones, such as vitamin D3, which regulates receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) expression levels positively and negatively. It is also used as an inducer of osteoclast formation in vitro. OBJECTIVE: To evaluate the effect of vitamin D (VitD) on osteoclastic activity in cultured calvariae. MATERIAL AND METHOD: Fragments of mice calvaria were cultured in basic medium (control) or VitD-containing medium (10 nM low dose; 100 nM high dose). After intervals of 24, 48 and 72 hours, the culture medium was collected for calcium measurement and the fragments were fixed for confocal microscopy. RESULTS: It was observed that the addition of vitamin D in both concentrations promoted an increase of calcium levels in the medium. Nonetheless, statistically significant differences between high and low doses were detected only in the 24-hour interval. In the microscopic analysis, areas of demineralization were more extensive among calvariae cultured with high doses of VitD. CONCLUSION: VitD increases osteoclastic activity in vitro in a dose-dependent effect.