Las proteínas B3 y PDI aisladas de plaquetas humanas se unen con el rotavirus ECwt in vitro / B3 and PDI proteins isolated from human platelets bind with ECwt rotavirus in vitro
Rev. Fac. Med. (Bogotá)
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58(2): 115-127, abr.-jun. 2010.
Article
in Spanish
| LILACS
| ID: lil-613127
RESUMEN
Antecedentes. En la actualidad, no se dispone de integrina b3 de manera comercial y la PDI comercial tiene costos muy altos, lo cual dificulta el acceso a estas dos proteínas para realizar estudios conducentes a establecer si b3 y PDI interactúan con cepas de rotavirus silvestres. Objetivo. Explorar una metodología que permitiese aislar las proteínas b3 y PDI a partir de plaquetas humanas para generar anticuerpos policlonales en conejo contra la integrina b3 y evaluar la interacción entre las proteínas PDI y b3 con el rotavirus ECwt. Material y métodos. Mediante la técnica de electroforesis preparativa en condiciones reductoras, se separaron las proteínas de un lisado de plaquetas humanas y posteriormente se electroeluyeron. Mediante las técnicas de coinmunoprecipitación, Western blotting y ELISA de captura se analizó la interacción del rotavirus ECwt con las proteínas b3, y PDI. Resultados. Las proteínas totales de un lisado de plaquetas humanas se separaron mediante electroforesis en condiciones reductoras, se identificaron las proteínas b3 y PDI en un segmento del gel, utilizando anticuerpos comerciales en Western blotting y luego se aislaron estas dos proteínas del resto del gel. Posteriormente las proteínas se electroeluyeron del segmento del gel y se analizó su pureza. Conclusión. Se logró purificar parcialmente a partir de plaquetas humanas, utilizando electroforesis preparativa, cantidades relativamente altas de proteína b3 y PDI. El aislamiento de estas proteínas nos permitió generar un anticuerpo policlonal contra b3 y establecer que b3 y PDI se unen in vitro, luego de incubar las proteínas aisladas con el rotavirus ECwt, e in vivo, después de incubar el rotavirus con las vellosidades aisladas del intestino delgado de ratón lactante de la cepa ICR.
Full text:
Available
Index:
LILACS (Americas)
Main subject:
Blood Platelets
/
Proteins
/
Rotavirus
Limits:
Animals
Language:
Spanish
Journal:
Rev. Fac. Med. (Bogotá)
Journal subject:
Medicine
Year:
2010
Type:
Article
Affiliation country:
Colombia
Institution/Affiliation country:
Universidad Distrital Francisco José de Caldas/CO
/
Universidad Nacional de Colombia/CO
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