Genotipificación de plasmodium falciparum por PCR múltiple por medio de los genes msp1, msp2 y glurp, en cuatro localidades de Colombia / Genotypic survery of plasmodium falciparum based on the msp1, msp2 and glurp genes by multiplex PCR

RESUMEN

Introducción. La diversidad genética de Plasmodium falciparum constituye un obstáculo para el éxito de la terapia antipalúdica, pues le permite al parásito evadir la respuesta inmunitaria del huésped, lo cual genera cambios en su composición antigénica y resistencia a los medicamentos antipalúdicos.Objetivo. Estudiar la diversidad genética de P. falciparum procedente de cuatro localidades colombianas mediante el análisis de los genes polimórficos msp1, msp2 y glurp. Materiales y métodos. Se genotipificaron 81 muestras mediante PCR múltiple de pacientes infectados con P. falciparum, procedentes de Tierralta (Córdoba), Inírida (Guainía), La Carpa (Guaviare) y Casuarito (Vichada).Resultados. Para el gen msp1 se detectó MAD20 en todas las muestras analizadas. Para el gen msp2 se halló con mayor frecuencia la familia alélica IC (96,3%) comparada con FC (4,9%). En ambas familias se evidenció polimorfismo de tamaño, y se encontraron bandas en un rango entre 467 y 513 pares de bases (pb) para IC y entre 286 y 300 pb para FC. Para el gen glurp se detectaron diferentes tamaños de productos de PCR, los cuales se agruparon en cinco genotipos: I (600-699 pb) 2,5%, II (700-799 pb) 19,8%, III (800-899 pb) 72,8%, IV (900-999 pb) 1,2% y V (1.000-1.099 pb) 3,7%.Conclusiones. Nuestros resultados demuestran que el marcador molecular msp1 no proporciona información útil para diferenciar las poblaciones parasitarias de P. falciparum. El gen msp2 es apropiado para evaluar la diversidad genética, pero requiere ensayos más finos que permitan diferenciar claramente el polimorfismo de tamaño en las dos familias. Los resultados obtenidos con el gen glurp evidenciaron una gran diversidad genética en las poblaciones de P. falciparum que circulan en el país y sugieren que este gen puede ser útil para diferenciar nuevas infecciones de infecciones recurrentes o recrudecimientos.

ABSTRACT

Introduction. The genetic diversity of Plasmodium falciparum has been one of the major obstacles for the success of anti-malaria drug therapy. It provides the parasite an ability to evade the host’s immune response by generating changes in its antigenic composition and resistance to antimalarial drugs.Objective. The genetic diversity of P.falciparum was characterized in 4 Colombian localities through the analysis of polymorphic genes. Materials and methods. Eighty-one samples were obtained from patients with uncomplicated P. falciparum malaria and screened for polymorphic variants of msp1, msp2 (merozoite surface proteins) and glurp (glutamate-rich protein) with a multiplex PCR assay. The geographic regions sampled were Tierralta (Córdoba), in northwestern Colombia and in the Orinoco river watershed of eastern Colombia-- Inírida (Guainía), La Carpa (Guaviare), and Casuarito (Vichada). Results. The MAD20 variant was detected in all samples analyzed for the msp1 gene. For the msp 2 gene, the IC allelic family was found in 96.3% of the samples as compared to 4.9% of the samples with the FC family. Both families showed size polymorphism with bands between 467 and 513 basepairs (bp) for IC and 286 and 300 bp for FC. PCR products of differing sizes were detected for the glurp gene and grouped into 5 size classes: I (600-699 bp) 2.5%, II (700-799 bp) 19.8%, III (800-899 bp) 72.8%, IV (900-999 bp) 1.2% and V (1000-1099 bp) 3.7%.Conclusions. The msp1 molecular marker did not provide information for differentiating P. falciparum parasite populations. The msp 2 gene was more suitable for studying the genetic diversity, however, further studies are required to identify polymorphisms within the two allelic families. The glurp gene showed a great genetic diversity of circulating P. falciparum populations, and suggested that this gene may be useful for distinguishing between recrudescence and reinfection.