Perfil mutacional dos genes responsáveis pela resistência de Mycobacterium tuberculosis a rifampicina (rpoB) e isoniazida (katG e inhA) em cepas isoladas no Estado de São Paulo e avaliação do uso da PCR em tempo real para a detecção rápida destas mutações / Mutational profile of genes responsible for Mycobacterium tuberculosis resistance to rifampicin (rpoB) and isoniazid (katG and inhA) in strains isolated from the São Paulo State and evaluation the use of real-time PCR for rapid detection

RESUMO

INTRODUÇÃO. A detecção rápida de isolados resistentes contribui para prevenir a transmissão e orientar na escolha inicial das drogas para o tratamento da tuberculose. A PCR em tempo real (RT-PCR) detecta todas as mutações do Mycobacterium tuberculosis (MTB) que ocorrem na região de 81pb do gene rpoB, códon 315 do katG e sítio de ligação ribossomal inhA, responsáveis pela resistência à rifampicina (RIF) e isoniazida (INH), respectivamente. OBJETIVO. O objetivo deste estudo foi avaliar a sensibilidade, especificidade e rapidez do método de RT-PCR em determinar a susceptibilidade de isolados de MTB à RIF e INH em comparação ao método tradicional de susceptibilidade às drogas. MATERIAL E MÉTODOS. Foram analisados 988 isolados de MTB do Estado de São Paulo, o método BACTEC™MGIT™ 960 foi utilizado como padrão de referência para os testes de susceptibilidade às drogas. Na RT-PCR a susceptibilidade à INH e/ou RIF foi determinada pelo padrão de reatividade de diferentes sondas para regiões específicas dos genes katG e inhA e rpoB, respectivamente. O sequenciamento dos fragmentos dos genes amplificados foi utilizado como contraprova. RESULTADOS. A sensibilidade da RT-PCR na detecção de resistência à INH pelos genes katG e inhA, individualmente, foram de 55% e 25%, respectivamente e 73% quando combinadas; e para a RIF foi de 99%. A especificidade para ambos os testes foi de 100%. Todas as mutações no gene katG foram no códon 315 e 87% das mutações no sítio de ligação ribossomal inhA foram na posição -15. A maioria das mutações no gene rpoB ocorreram nos códons 531 (68%) seguidos pelo códon 526 (23%). CONCLUSÃO. Nossos resultados confirmam que a RT-PCR pode detectar a resistência à RIF e INH em menos de 4 horas com alta sensibilidade. O perfil mutacional dos isolados analisados foi similar aos descritos na literatura.