Caracterização química da proantocianidina e avaliação longitudinal da aplicação de substâncias inibidoras da ação das metaloproteinases na resistência de união a dentina / Chemical characterization of the proanthocyanidin and longitudinal evaluation of the application of metalloproteinase inhibitors in dentin bond strength

RESUMO

Tendo em vista a necessidade de inibir a atividade enzimática das metaloproteinases (MMPs) para postergar a durabilidade de restaurações de resina composta, aliada à escassezde conhecimento sobre os efeitos destas substâncias na estrutura do colágeno, o presente estudo objetivou, em um primeiro momento, caracterizar quimicamente diferentes extratosde proantocianidina comercialmente disponíveis, buscando-se selecionar aquele que apresentasse características mais favoráveis para adsorção em colágeno. Em um segundomomento, objetivou-seavaliar as interações químicas do extrato selecionado, correlacionando-se com outras soluções inibidoras de MMPs e diferentes agentes condicionadores teciduais, na estrutura molecular e integridade do colágeno. Em umterceiro momento, objetivou-se avaliar os efeitos das diferentes substâncias testadas anteriormente na durabilidade de restaurações de resina composta, por meio de teste demicrotração em diferentes tempos de armazenamento, além de se testar o uso do hipoclorito de sódio como uma alternativa para envelhecimento dos corpos-de-prova. Para aprimeira fase experimental, os extratos MegaNatural-BP, MegaNatural Gold, Leucoselect e GNC foram caracterizados por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa(HPLC-RF), espectrometria de massas com ionização por spray de elétrons (ESI-MS) e por espectroscopia de absorção no Infravermelho por transformada de Fourier (FTIR). Foipossível analisar os diferentes constituintes químicos dos extratos, por meio da identificação de monômeros e oligômeros de proantocianidinas, além de quantificar o teor deproantocianidina e dos demais constituintes dos produtos avaliados. Desta forma, determinou-se que o produto MegaNatural-BP foi o que apresentou melhores característicaspara uso clínico, sendo o extrato selecionado para as fases posteriores deste estudo, com poucas quantidades de lipídios e açúcares e com teor de proantocianidina aproximado de91%. Em seguida, foram avaliadas diferentes soluções inibidoras de MMPs (clorexedina 2%, extrato MegaNatural:'BP e solução inibidora com íons metálicos), assim como dois agentes condicionantes superficiais (ácido fosfórico a 35% e solução de EDTA O,lM), na integridade da tripla hélice do colágeno por meio da técnica da reflexão total atenuada da espectroscopia de absorção no infravermelho por transformada de Fourier (ATR-FTIR). Observou-se, por meio da análise das bandas 1235 cm-l e 1450 cm-l de membranas detendão profundo de Aquiles bovino, que nenhuma das substâncias testadas modificou significativamente a estrutura helicoidal da molécula de colágeno, sendo indicadas para posterior uso clínico em dentina.

ABSTRACT

Given the need to inhibit the enzymatic activity of matrix metalloproteinases (MMPs) to postpone the longevity of composite resin restorations, combined with the lack ofknowledge about the effects of these substances on the collagen structure, this study aimed, at first to chemically characterize different commercially available proanthocyanidinextracts, aiming to select the one with the more favorable characteristics for adsorption on collagen. In a second step, aimed to evaluate the chemical interactions of the selectedextract and to correlate with other inhibitors of MMPs and different tissue conditioners inthe molecular structure and integrity of collagen. In a third step, aimed to evaluate the effects of different substances previously tested on the longevity of composite restorationsby microtensile test at different storage periods, in addition to test the use of sodium hypochlorite as an alternate specimens aging. For the first phase, the extracts MegaNatural¬BP, MegaNatural Gold, Leucoselect and GNC were characterized by reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC-RF), mass spectrometry with electron sprayionization (ESI-MS) and by absorption spectroscopy by Fourier transform infrared (FTIR). It was possible to analyze the chemical constituents of different extracts, throughidentification of monomers and oligomers of proanthocyanidins, as well as quantify the amount of proanthocyanidin and other constituents of the tested products. Thus, the selected extract for the later phases of this study was MegaNatural-BP that showed the best characteristics for clinical use, with lesse r amounts of fats and sugars and approximately 91%of proanthocyanidin contento In the second phase, we evaluated different MMPs inhibitors (chlorhexidine 2%, proanthocyanidin extract and inhibitor solution with metal ions) and twosurface conditioning agents (phosphoric acid 35% and EDTA 0.1 M) in the integrity of the collagen triple helix by the technique of attenuated total reflection spectroscopy absorptionby Fourier transform infrared (ATR-FTIR). It was observed through the analysis of the bands 1235 cm-l and 1450 cm-l from membranes of bovine deep Achilles tendon, that none of thecompounds tested significantly altered helical structure of collagen molecule, being recommended for clinical use in dentin.