Estudo da expressão citofotométrica do marcador tumoral Caspase-3 no adenocarcinoma de cólon / Citophotometric expression study of tumoral marker Caspase-3 on colon adenocarcinoma

RESUMO

RACIONAL O adenocarcinoma de cólon é a segunda causa mais comum de morte por câncer em homens e mulheres, sendo responsável por mais de cinco milhões de mortes por ano. No momento do diagnóstico apenas 70% dos tumores são ressecáveis, 75% são curáveis e 25% poderão ter recorrência da doença. A apoptose é uma das responsáveis pelo equilíbrio homeostático entre as células. Durante o desenvolvimento do processo de degeneração maligna celular o desequilíbrio na apoptose é considerado um dos principais marcos neoplásicos. A caspase-3 é uma das mais importantes moléculas na apoptose, sendo sua efetora principal. Sua expressão e prognóstico têm sido relatados em vários estudos e revisões com seu papel valorizado desde o surgimento do pólipo até a sua transformação maligna, com a taxa de apoptose diminuindo progressivamente. OBJETIVOS: Avaliar a expressão citofotométrica computadorizada do marcador Caspase-3 no adenocarcinoma de cólon; avaliá-lo nas fases evolutivas na classificação modificada de Dukes e comparar sua expressão nos tumores do lado direito e esquerdo do cólon. MÉTODOS: Utilizaram-se 19 casos de câncer recuperados de blocos de parafina confirmados por hematoxilina-eosina e submetidos à técnica imunoistoquímica da estreptavidina-biotina com anticorpo policlonal anti-caspase-3. Após este processo as lâminas marcadas foram submetidas à leitura pelo sistema SAMBA com o software IMUNNO 4.00. Foram analisados três índices marcagem (Label index), heterogeneidade e densidade óptica. Utilizaram-se a marcagem individual, avaliação da expressão do marcador e grupos definidos de tumores com classificação Dukes e pelo lado do tumor. RESULTADOS: A média do índice de marcagem da caspase-3 foi de 85,24 e da densidade óptica de 39,55. Na classificação Dukes de 12 tipos B tiveram índice de marcagem de 86,20 e a densidade óptica de 37,72 e para os 7 tipos C a área de marcagem foi de 85,66 e a densidade óptica foi de 42,71 não sendo possível identificar diferença em relação a classificação de Dukes. Quanto ao lado do tumor os 11 tumores à esquerda tiveram índice de marcagem de 86,65 e densidade óptica de 43,29 e os 8 à direita tíndice de marcagem de 83,29 e densidade óptica de 39,44 não sendo possível observar diferença estatística significante. CONCLUSÕES: A caspase-3 possui alta expressão individual revelando-se marcador de boa utilidade no estudo do adenocarcinoma de cólon e da fase pró-apoptóica da sua tumorigênese pelo seu alto grau de índice de marcagem e densidade óptica. Em relação à classificação Dukes não houve diferença entre os tipos B e C, como também em relação ao lado direito e esquerdo do cólon.

ABSTRACT

BACKGROUND: Colon adenocarcinoma is the second cause of cancer death in men and women, responsible for more than five million deaths each year. At the diagnosis, only 70% of tumors are resectable, 75% curative and 25% might have disease recurrence. Apoptosis is responsible for homeostatic equilibrium among cells. During the development of the cellular malignant degeneration, an abnormal apoptosis plays an important role in the neoplasm transformation. Caspase-3 is one of the most important molecules in apoptosis, considered as the principal executioner. Caspase-3 expression and its prognosis have been mentioned in a variety of study and revision as its role being emphasized since the onset of polyp formation until the malignant transformation, as apoptosis declines progressively. AIM: To evaluate the computerized image cytophotometric expression of Caspase-3 in colon adenocarcinoma; to evaluate in the respective phases of Dukes-modified Classification and to compare its expression on right-sided and left-sided colon tumors. METHODS: Nineteen recovery of sampled-tissue in paraffin blocks confirmed by hematoxylin-eosin and submitted to immunohistochemistry estreptavidin-biotin method using antibody polyclonal anti-caspase-3. Following this process, marked slides were submitted SAMBA reading using software IMUNNO 4.00. Three indexes were analyzed label index, heterogeneity and optical density. Individual labeling, marker expression evaluation and predefined tumors groups under Dukes Classification and side of tumor occurrence were considered. RESULTS: The average labeling index for caspase-3 was 85,24, where as for optical density was 39,55 pixels. According to Dukes Classification, 12 type B presented labeling index of 86,20 and optical density of 37,72 and for 7 samples type C labeling index corresponded to 85,66 and optical density equals to 42,71, unable to identify the difference regarding to Dukes Classification. Regarding to the side of tumor occurrence, 11 left-sided tumors had labeling index of 86,65 and optical density of 43,29 and the 8 right-sided tumors had labeling index of 83,29 and optical density of 39,44, unable to observe significant statistical difference. CONCLUSION: Caspase-3 presents a distinct value expression, revealing as useful marker in colon adenocarcinoma study and its proapoptotic phase at the tumorigenesis due to its high labeling index and optical density. Regarding to Dukes Classification there was no difference between types B and C, as well as right and left sided-related colon tumor occurrence.