In vitro susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis complex strains isolated from seals to antituberculosis drugs

ABSTRACT

Mycobacteria strains belonging to the Mycobacterium tuberculosis complex were isolated from seals found in the South Atlantic. The animals were received in Mundo Marino installations and treated for Mycobacterium tuberculosis complex by conventional therapy of intensive care and enriched food supply; however, in all cases treatment failed. Necropsies of all animals revealed extensive lesions compatible with tuberculosis involving lungs, liver, spleen and lymphatic nodes. Classical biochemical methods as well as molecular techniques using the IS 6110 probes were performed for mycobacterial identification. Furthermore, the LCx M. tuberculosis assay (Abbott Laboratories) identified all strains as Mycobacterium tuberculosis complex members. The in vitro susceptibility pattern was examined in mycobacterial strains isolated from seven seals and in 3 reference strains - BCG, H37Rv ( M. tuberculosis) and AN5 ( Mycobacterium bovis) - to 4 medications - isoniazid, rifampin, streptomycin and ethambutol. Minimal inhibitory drug concentrations were determined by the Mycobacterial Growth Indicator Tube (BD Argentina) method and a microdilution and colorimetric assay using 3-(4-5 dimethyltiazol-2)-2,5 diphenyltetrazolium bromide. All the isolates and the reference strains BCG and AN5 were inhibited by MIC values similar to those of H37Rv with good agreement obtained by both techniques. These findings suggest that a therapeutic regimen aimed to seals diagnosed with tuberculosis play an important role in the prevention of tuberculosis transmission from infected animals to humans that are in routine contact with them.

RESUMEN

Susceptibilidad in vitro a los medicamentos anti-tuberculosos de aislados de cepas del complejo Mycobacterium tuberculosis obtenidos a partir de lobos marinos Se han hallado cepas de micobacterias aisladas de lobos marinos del Atlántico sur y pertenecen al complejo de Mycobacterium tuberculosis. Los animales se recibieron en las instalaciones del Oceanario Mundo Marino y fueron tratados apropiadamente para su recuperación con la terapia convencional, cuidados intensivos y suplemento alimentario pero no se observó mejoría en su estado general. Se practicaron necropsias en todos los animales y se observaron lesiones extensas compatibles con tuberculosis en pulmones, hígado, bazo y ganglios linfáticos. Para la identificación de las micobacterias, se realizaron pruebas bioquímicas y técnicas de biología molecular con la sonda IS 6110. Además, se identificaron todas las cepas como pertenecientes al complejo M. tuberculosis mediante el equipo LCx M. tuberculosis Assay (Abbott Laboratories). El objetivo de este estudio fue determinar in vitro la sensibilidad de las cepas patrón BCG, H37Rv ( M. tuberculosis) y AN5 ( Mycobacterium bovis) y la de las siete aisladas de lobos marinos a isoniacida, rifampicina, estreptomicina y etambutol. La concentración inhibitoria mínima (CIM) de las drogas antituberculosas se llevó a cabo con el equipo Mycobacterial Growth Indicator Tube (MGIT, BD, Argentina) y la microdilución con el ensayo colorimétrico con bromuro de 3-(4-5 dimetiltiazol-2)-2,5 difeniltetrazolio. Todos los aislamientos y las cepas de referencia BCG y AN5 se inhibieron con valores CIM de los de H37Rv con buena concordancia entre los resultados obtenidos con ambas técnicas. Los hallazgos permiten sugerir que podrían ser una importante ayuda terapéutica en los lobos marinos con diagnóstico de tuberculosis y evaluar el posible papel sanitario en la prevención y transmisión de la tuberculosis de los animales a los humanos y el trabajo en conjunto.