Implementación ee técnicas sencillas de remoció de proteínas mayoritarias de pplasma sanguíneo para análisis por electroforesis bidimensional (2d) / Implementatio off simple techniques for removal majority proteins from blood plasma and its posterior analysis by bi-dimensional (dd) / Electroporesis aaplicação de técnicas simples de remoçãode proteínas maajoritárias do plasma sanguíneo para sua posterior análise por eletroforese bidimensional (2d)

RESUMEN

El plasma sanguíneo representa una de las muestras de mayor interés en el diagnóstico- pronóstico de diversas enfermedades. Sin embargo, constituye la muestra de mayor dificultad para establecer su proteoma, debido a la presencia de interferencias y proteínas abundantes que dificultan la detección de proteínas minoritarias. Con el objetivo de mejorar la resolución de las proteínas separadas por técnicas electroforéticas, se realizó una comparación de diferentes métodos de remoción de proteínas mayoritarias del plasma de pacientes con síndrome coronario agudo, usando técnicas de precipitación con sales y solventes orgánicos a diferentes concentraciones. La remoción de proteínas del plasma tratado mediante estas metodologías se verificó por análisis proteómicos usando electroforesis de proteínas (1D-y 2D-SDS-PAGE), análisis de imágenes y técnicas de bioinformática. El análisis mostró que metodologías sencillas como el tratamiento con acetona 75% (v/v) disminuyó la concentración de albúmina, retiró las interferencias que dificultan la detección de proteínas minoritarias, aumentando la intensidad de las manchas proteicas separadas mediante electroforesis 2D, y por consiguiente, mejorando la resolución y la detección de las proteínas separadas del plasma sanguíneo.

ABSTRACT

The blood plasma samples are one of the most interesting in the diagnosis, prognosis of various diseases. However, the sample is more difficult when setting its proteome, due to the presence of interference and abundant proteins that hinder the detection of minor proteins. To improve the resolution of proteins separated by electrophoretic techniques, we compare different methods of removal of major proteins in plasma of patients with acute coronary syndrome, by using techniques of precipitation with salts and organic solvents at different concentrations. Subsequently, the removal of plasma proteins treated by these methods was verified by proteomic analysis by using protein electrophoresis (1D-and 2D-SDS-PAGE), image analysis and bioinformatics techniques. The analysis showed that simple methods such as treatment with acetone 75% (v/v) decreased the concentration of albumin, removed the interferences that hinder the detection of minor proteins, increasing the intensity of protein spots separated by 2D electrophoresis, and improving the resolution and detection of separated proteins of blood plasma.

RESUMO

O plasma sanguíneo representa uma das amostras de maior interesse no diagnóstico- prognóstico de diversas doenças. No entanto, constitui a amostra de maior dificuldade no momento de estabelecer o seu proteôma devido ã s interferências e ã s proteínas abundantes que dificultam a detecção de proteínas minoritárias. A fim de melhorar a resolução de proteínas separadas por técnicas eletroforéticas, comparamse diferentes métodos de remoção de proteínas majoritárias do plasma de pacientes com síndrome coronária agudo, usando técnicas de precipitação com sais e solventes orgânicos em diferentes concentrações. Posteriormente, a remoção de proteínas do plasma tratado por meio destas metodologias foi verificada a través da análise proteômica usando eletroforese de proteínas (1D e 2D SDS-PAGE), análise de imagens e técnicas de bioinformática. A análise mostrou que metodologias simples como o tratamento com acetona 75% (v/v) diminuiu a concentração de albumina, retirou as interferências que dificultavam a detecção de proteínas minoritárias, aumentando a intensidade dos spots de proteínas separados por eletroforese 2D, e melhorando a resolução e detecção das proteínas separadas do plasma sanguíneo.