Determinación de la mutación K76T de la proteína transportadora resistente a Cloroquina de Plasmodium falciparum (PFCRT) en individuos con malaria en una zona de transmisión moderada del Caribe colombiano / Determination of K76T mutation in the Plasmodium falciparum Chloroquine resistance transporter (PFCRT) in people with malaria in a zone of moderate transmission of the Colombian Caribbean

RESUMEN

Introducción: La resistencia de Plasmodium falciparum a los antimalaricos, está relacionada con mutaciones puntuales en proteínas esenciales en la biología del parásito. La mutación K76T en la proteína transportadora resistente a Cloroquina (CRT) es un marcador molecular de resistencia a este fármaco. En Colombia se ha reportado una frecuencia del 100% a esta mutación. Objetivo: Determinar la frecuencia de la mutación K76T de CRT en Plasmodium falciparum, infectando sangre de individuos con malaria adquirida en una zona del Caribe Colombiano con transmisión moderada. Materiales y métodos: El ADN del parásito se extrajo de láminas diagnósticas usando Chelex-100. Un fragmento de 148 pb de Pfcrt se amplificó por PCR, la mutación K76T fue determinada por análisis de Polimorfismos en Longitud de Fragmentos de Restricción (RFLP) usando la endonucleasa Apo I, los productos fueron separados por electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE). Resultados: Se estudiaron 66 muestras de individuos con malaria adquirida en seis municipios del Magdalena. Se logró amplificación de Pfcrt en 56 y la mutación T76 fue detectada en 55 (98,2%). La presencia de una muestra con el alelo K76 silvestre indicaría la existencia de reversión de la mutación K76T en Colombia, este fenómeno se ha observado en algunos países del continente africano, donde se reportó recuperación de la sensibilidad a Cloroquina. Conclusión: Este estudio es un primer acercamiento hacia el conocimiento de la resistencia a los antimaláricos en zonas de transmisión moderada en Colombia.

ABSTRACT

Introduction: The antimalarial drugs resistance from Plasmodium falciparum is related to point mutations in the essential proteins to the parasite biology. The K76T mutation in the Plasmodium falciparum Chloroquine resistance transporter (PFCRT) is a molecular marker resistance to Chloroquine. In Colombia the frequency of this mutation is 100%. Objective: To determine the frequency of K76T mutation in the Plasmodium falciparum CRT, infecting blood from people with malaria in the Colombia Caribbean zone with moderate transmission. Materials and methods: The DNA of the parasite was extracted from diagnostic slide using Chelex-100. A fragment of 148 pb of Pfcrt was amplified by PCR, the K76T mutation was evaluated by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) using endonuclease Apo I, the products were separated by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Results: Sixty six samples from people with malaria of six municipalities of Magdalena were studied. Fifty six DNA samples amplified of Pfcrt gene, T76 mutation was detected in 55 (98.2%). Occurrence of one sample carried the wild allele K76 would indicated the reversion of K76T mutation in Colombia, this phenomenon has been observed in some countries of the African continent, where recovery of sensitivity to Chloroquine was reported. Conclusions: This study is the first approach towards the knowledge of the antimalarials resistance in zones with moderate transmission in Colombia.