Proteasas de Pseudomonas aeruginosa: caracterización parcial y relaciones inmunológicas con proteasas de diferentes taxas / Proteases of pseudomonas aeruginosa: partial characterization and immunological relations with proteases of different rates

RESUMEN

El presente trabajo tuvo el propósito de aislar, caracterizar y estudiar inmunológicamente, dos enzimas extracelulares proteolíticas de una cepa de Pseudomonas aeruginosa (Pa) tomada como prototipo, para luego compararlas con las producidas por cepas de la misma o diferentes especies bacterianas. La cepa prototipo mostró por cromatografía de intercambio iónico las dos enzimas proteolíticas identificadas como A y B, sobre la base de su mayor o menor electronegatividad. La enzima A fue activa sobre caseína y no sobre elastina y necesitó fuerza iónica adicional para eluir del intercambiador. la enzima B fue activa sobre caseína y elastina y no necesitó fuerza iónica adicional para su elución. Fue la responsable del 80% o más de la actividad total. Con las dos enzimas obtenidas por poliacrilamida, se inmunizaron conejos, obteniéndose antisueros (As A y As B), con los que se efectuaron reacciones inmunológicas. Los As A y As B inmunoprecipaitaron las enzimas respectivas, tanto de la solución enzimática concentrada como de las obtenidas por cromatografía. Estos dos componentes enzimáticos no mostraron identidad inmunológica. Los antisueros homólogos fueron capaces de inhibir la actividad enzimática in vitro. Seis cepas adicionales de Pa mostraron un comportamiento inmunoenzimático similar a la prototipo. Dos de Serratia marcescens, aisladas de pacientes, mostraron por zimograma una especie proteolítica coincidente con la A de Pa, activa sólo sobre caseína y que reaccionó solamente con el As A. Una cepa de Pseudomonas fluorescens conservada en laboratorio no mostró actividad en el zimograma y tampoco reactividad con los As A y As B