Avaliação do papel da microbiota intestinal do Aedes aegypti no desenvolvimento esporogônico do Plasmodium gallinaceum / Evaluation of the role of the intestinal microbiota Aedes aegypti development of esporogônico Plasmodium gallinaceum

RESUMO

A malária é responsável por cerca de 350 a 500 milhões de casos clínicos anuais,permanecendo como um dos maiores problemas de saúde mundial. Estudos sobre a influênciada microbiota intestinal do vetor no desenvolvimento do ciclo de vida dos parasitos vêmsendo desenvolvidos. Em mosquitos, as pesquisas vêm mostrando que infecções por bactériasdo intestino podem inibir o desenvolvimento esporogônico dos parasitas da malária. Nopresente trabalho, o papel da microbiota intestinal do Aedes aegytpi infectado comPlasmodium gallinaceum foi avaliado. Os insetos foram submetidos a cinco diferentesantibióticos (canamicina, carbenicilina, espectinomicina, gentamicina e tetraciclina). Somentecanamicina e carbenicilina tiveram efeito sob a infecção com o parasito. Para esses doisantibióticos e o controle, técnicas de cultivo bacteriano de isolamento e sequenciamento doDNA ribossomal 16S foram feitas. Asaia bogorensis, Asaia krungthepensis, Asaia siamensis,Bacillus licheniformis e Chryseobacterium meningosepticum foram identificadas para ogrupo controle. No grupo tratado com carbenicilina foram identificadas Chryseobacteriummeningosepticum e uma bactéria da família Microbacteriaceae, e para o grupo comcanamicina Microbacterium lacticum. Este trabalho sugere que a interação entre espécies deAsaia e C. meningosepticum são relevantes na resistência/suscetibilidade do A. aegypti ao P.gallinaceum. Para observar o efeito do tratamento com os dois antibióticos que mostraramefeito na infecção na expressão de peptídeos antimicrobianos, os níveis de gambicina edefensina foram medidos utilizando-se a técnica de Real-time PCR. Os níveis de defensina semostraram super-expressos quando os mosquitos foram submetidos aos tratamentos comcanamicina e carbenicilina, enquanto gambicina se mostrou super-expressa nos mosquitostratados com canamicina e sub-expressa naqueles com carbenicilina. A expressão desses doisAMPs também foi medida quando esses grupos de insetos se alimentaram com sangue e comsangue infectado. Nossos resultados mostraram que a expressão de defensina e gambicina nogrupo tratado com carbenicilina alimentado com sangue apresentou um aumento de 24h para36h, e uma queda no grupo controle alimentado com sangue. Insetos tratados comcanamicina infectados aumentaram a expressão de defensina 24h e 36h após a alimentação,diminuídas nos tratados com carbenicilina. É observada uma inibição do mRNA degambicina no grupo carbenicilina infectado sugerindo assim que a ativação desse peptídeonão ocorre somente pelo parasita e necessita da ação da microbiota. Estes resultados indicamque as bactérias associadas ao intestino do A. aegypti tem um papel importante na infecção eresposta imune ao parasito.