Estandarización de un ensayo inmunoenzimático para la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en el lupus eritematoso sistémico / Standardization of an immunoenzymatic assay to detect anti-double-stranded DNA antibodies in systemic lupus erythematosus
Rev. cuba. invest. bioméd
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31(4): 467-479, oct.-dic. 2012.
Article
in Spanish
| LILACS
| ID: lil-660158
RESUMEN
Introducción:
los anticuerpos anti-ADN doble cadena son un marcador serológico diagnóstico de lupus eritematoso sistémico (LES). El ensayo inmunoenzimático en fase sólida es una técnica rápida y rentable para su detección.Objetivo:
estandarizar un ELISA que detecte anti ADN doble cadena para el diagnóstico del lupus.Métodos:
los pasos que se siguieron para la estandarización incluyeron la preparación de controles, la sensibilización de la fase sólida, la selección de los amortiguadores y conjugado del ensayo, la evaluación de las condiciones de reacción y la determinación del nivel de corte. Además se realizó el estudio de inespecificidades. Se probaron 5 tipos de placas de poliestireno y se compararon ADN plasmádico de E.coli, pUC19 y ADN genómico humano como antígenos de recubrimiento. Se evaluó el efecto de la poli-L-lisina y la irradiación de la placa con luz ultravioleta, en la fijación del antígeno. El valor de corte del ensayo se determinó por el método del valor límite.Resultados:
se observó disociación del antígeno cuando no se utilizó poli-L-lisina en el pretratamiento de la placa y la irradiación con luz UV no favoreció la unión del ADN a la fase sólida. No se encontraron diferencias significativas (p=0,710) entre ambos ADN, en el recubrimiento. El valor de corte (K=3) permitió clasificar como positivas 28 muestras (63,6 porciento) de pacientes con LES.Conclusiones:
el método estandarizado, con el empleo de ADN plasmádico, permitió la detección de anticuerpos anti-ADN doble cadena en pacientes con lupusABSTRACT
Introduction:
anti-double-stranded DNA antibodies are a diagnostic serological marker for systemic lupus erythematosus (SLE). The solid-phase immunoenzymatic assay is a rapid, cost-effective technique for their detection.Objective:
Standardize an ELISA detecting anti-double-stranded DNA for the diagnosis of lupus.Methods:
the standardization process included the followingsteps:
preparation of controls, sensitization of the solid phase, selection of buffers and assay conjugate, evaluation of reaction conditions and determination of the cut-off level. A study of unspecificities was also conducted. Five types of polystyrene plates were tested, and a comparison was made of E. coli (pUC19) plasmid DNA and human genomic DNA as coating antigens. An evaluation was conducted of the effect of poly (L-lysine) and irradiation of the plate with ultraviolet light upon antigen fixation. The assay cut-off value was determined by the limit value method.Results:
antigen dissociation was observed when poly (L-lysine) was not used in the pretreatment of the plate and UV light irradiation did not foster DNA binding to the solid phase. No significant differences were found (p=0.710) between the two DNA coatings. The cut-off value (K=3) made it possible to classify 28 samples of patients with SLE as positive (63.6 percent).Conclusions:
the method standardized with the use of plasmid DNA enabled detection of anti-double-stranded DNA antibodies in patients with lupus
Full text:
Available
Index:
LILACS (Americas)
Main subject:
DNA
/
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
/
Lupus Erythematosus, Systemic
Language:
Spanish
Journal:
Rev. cuba. invest. bioméd
Journal subject:
Medicine
Year:
2012
Type:
Article
Affiliation country:
Cuba
Institution/Affiliation country:
Universidad de Ciencias Médicas Carlos J Finlay/CU
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