Cassia alata leaf extract induces cytotoxicity in A549 lung cancer cells via a mechanism that is caspase 8 dependent / El extracto de la hoja de cassia alata induce citotoxicidad en las células A549 del cáncer pulmonar humano a través de un mecanismo dependiente de la caspasa 8

ABSTRACT

OBJECTIVE: To evaluate the cytotoxic effect of a hexane extract of Cassia alata leaves in A549 lung cancer cells. METHOD: Parental A549 lung cancer cells were exposed to various concentrations (100"180 µg/ml) of Cassia alata leaf extract for 24 hours. Following treatment, the cells were evaluated using the 3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay to determine the cytotoxic effect of the extract. Caspase 8, 3 and 9 negative A549 cells were also prepared using lentiviral based shRNA knockdown of the caspase 8, 3 and 9 genes, respectively. The cytotoxic effect of Cassia alata leaf extract was then evaluated in these knockdown cells using the MTT assay. Chemical analysis was performed on the extract using high performance liquid chromatography (HPLC). RESULTS: Cassia alata extract was cytotoxic in parental and caspase-9 negative, but not caspase 3 and 8 negative A549 cells. The IC50 values were 143 µg/ml and 145 µg/ml in parental and caspase 9 negative A549 cells respectively. The flavanoid kaempferol was identified as a constituent of Cassia alata leaf extract. CONCLUSIONS: Cassia alata produces cytotoxicity in A549 cancer cells that is mediated by caspase 8 activation. This effect may be attributable to kaempferol.

RESUMEN

OBJETIVO: Evaluar el efecto citotóxico de un extracto de hexano de hojas de Cassia alata en las células A549 del cáncer pulmonar. MÉTODO: Células A549 parentales del cáncer pulmonar fueron expuestas a varias concentraciones (100-180 µg/ml) de un extracto de la hoja de Cassia alatadurante 24 horas. Tras el tratamiento, las células fueron evaluadas usando el ensayo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) a fin de determinar el efecto citotóxico del extracto. También se prepararon células A549 negativas caspasa 8, 3 y 9 mediante silenciamiento génico vía ARN (shRNA knockdown) de los genes de las caspasas 8, 3 y 9 respectivamente, sobre la base de la inserción de vectores lentivirales. Entonces, usando un ensayo MTT se procedió a evaluar el efecto citotóxico del extracto de hojas de Cassia alataen éstas células genéticamente modificadas. Se realizó un análisis químico del extracto utilizando cromatografía líquida de alta eficacia. (HPLC). RESULTADOS: El extracto de Cassia alata resultó ser citotóxico en las células A549 negativas parentales y caspasa 9, pero no en las negativas caspasa 3 y 8. Los valores de IC50 fueron 143 µg/ml y 145 µg/ml en las células A549 negativas parentales y caspasa 9 respectivamente. El flavonol kaempferol fue identificado como un constituyente del extracto de las hojas de Cassia alata. CONCLUSIONES: La Cassia alata produce citotoxicidad en las células cancerosas A549, mediada por la activación de la caspasa 8. Este efecto puede ser atribuido al kaempferol.