Análise da resposta celular e humoral de camundongos A/Sn imunizados com proteínas excretadas/secretadas(ESA) de Toxoplasma gondii / Cellular and humoral response analysis in A/Sn mice immunized with excreted proteins/secreted (ESA) of Toxoplasma gondii

RESUMO

A toxoplasmose, em suas várias formas clínicas, é um problema de saúde pública e o estudo de antígenos (Ags) com potencial uso em diagnóstico e composição de vacinas, um desafio. Culturas de células vêm sendo usadas em substituição a animais na produção destes antígenos. O presente estudo buscou primeiramente avaliar e otimizar a produção de dois antígenos provenientes de taquizoítos antígeno lisado de taquizoítos (ALT) e antígeno excretado/secretado (ESA) obtidos em células VERO sem adição de soro fetal bovino (SFB). Foram analisadas condições ideais de cultura, infectividade, presença de mutações genômicas e imunogenicidade em material obtido durante 30 passagens em cultura. Para tanto foram usadas técnicas de inoculação in vivo e in vitro, biologia molecular (PCR e sequenciamento) e ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados obtidos mostraram mesma eficiência da cultura celular em relação a animais e culturas com adição de SFB para a produção destes Ags. Ainda, não houve alteração na composição antigênica comprovada pela ausência de mutações durante as passagens em cultura. Para avaliar a capacidade de ESA em induzir resposta imune humoral e celular e proteger os animais de desafio com cepa virulenta de T. gondii, foram utilizados camundongos A/Sn divididos em três grupos (5 animais cada) A imunizado com 4 doses de ESA (20μg com ALUM), B infectado com a cepa ME-49 (controle positivo) e C, inoculado com ALUM (controle negativo). Usando ELISA, foram dosados nos soros desses animais anticorpos das diferentes classes de imunoglobulinase com células de baço estimuladas com Ags e mitógenos, dosadas citocinas em sobrenadante de cultura. Os resultados obtidos mostraram uma produção aumentada de anticorpos da classe IgG1 e de citocinas IFN-γ e TNF-α e baixa produção de IgM e IgG2a, IL10 e IL4 em animais imunizados com ESA em relação ao grupo controle positivo. Este mostrou...