Implementación de la Prueba del Multiplex PCR para el Gen DMD en Pacientes con sospecha de Distrofia Muscular de Duchenne/Becker y la identificación de una deleción de los exones 48-51 / Establishment of the multiplex PCR test for the DMD gene in patients with suspicion of Duchenne/Becker muscular dystrophy and the identification of a deletion of exons 48-51

RESUMEN

OBJETIVO: Estandarizar la prueba del Multiplex PCR para identificar las deleciones más frecuentes que incluye nueve exones 45, 48, 19, 17, 51, 8, 12, 44 y 4 del gen DMD cuyas mutaciones producen las distrofias musculares de Duchenne y de Becker. MATERIAL Y MÉTODO: La prueba fue realizada con 9 individuos, usando DNA obtenido de sangre periférica. De ellos, incluyendo 2 hermanos, tenían diagnóstico clínico de distrofia muscular compatible con DMD. Nueve pares de primers de los exones mencionados se usaron simultáneamente en una amplificación PCR y analizados por geles de agarosa y acrilamida. Uno de los pacientes (DMD-1) tenía diagnóstico molecular de deleción del exón 45 (control positivo) y 5 controles sanos (controles negativos). RESULTADOS: Los controles normales mostraron segmentos normales del tamaño esperado de los 9 exones luego de la amplificación PCR. El paciente DMD-1, evidenció la deleción del exón 45 (control positivo). Uno de los pacientes (DMD-3) presentó una nueva deleción que incluyó los exones 48 a 51, el resultado fue replicado en su hermano (también afectado con DMD). CONCLUSIONES: Se optimizó la prueba de Multiplex-PCR del gen DMD. Esto nos permite contar con una prueba para discernir gran número de pacientes con distrofia y determinar si tienen DMD/DMB. Uno de los pacientes mostró una mutación consistente en la deleción de los exones 48 a 51 que fué corroborada en su hermano afectado con distrofia.

ABSTRACT

OBJETIVE To establish the Multiplex PCR test to identify the most frequent mutations caused by deletions that include DMD gene exons 45, 48, 19, 17, 51, 8, 12, 44 and 4 causing Duchenne and Becker dystrophies (DMD/BMD). MATERIALS AND METHOD: The test was performed in DNA obtained from peripheral blood of 9 individuals, four of them (including 2 brothers) patients clinically diagnosed with muscular dystrophies compatible DMD. Nine pair of primers corresponding to the above mentioned exons were used simultaneously for PCR amplification and analyzed in agarose and polyacrilamide gel electrophoresis. One of the patients (DMD-1) used as positive control, had a previous molecular diagnosis with a deletion of exon 45. RESULTS: Normal controls showed the expected size for the 9 segments amplified by PCR. The study of the sample of patient DMD- 1 with previous molecular diagnosis corroborated the lack of the band corresponding to exon 45. One of the patients (DMD-3) evidenced a new deletion spanning exons 48 to 51, that mutation was also replicated in his dystrophic brother. CONCLUSIONS: We have established the Multiplex-PCR test for the DMD gene. This will enable us to have a system for the serial screening of patients suspected of Duchenne or Becker muscular dystrophy. One of the patients showed a deletion comprising exons 48 to 51, mutation corroborated in his afflicted dystrophic brother.