Evaluación de un método para el aislamiento de péptidos naturales de “Leishmania spp” / Evaluation of a Method for the Leishmania spp Natural Peptide Isolation

RESUMEN

Se cree que la habilidad de los macrófagos para procesar y presentar antígenos de Leishmania es necesaria para su eficiente interacción con células T efectoras y con citocinas secretadas localmente, lo cual induce actividad leishmanicida. Receptores de células T (RCT. reconocen péptidos antigénicos asociados a moléculas del Complejo Mayor de Histocompatibilidad (CMH. y esta interacción trimolecular inicia las vías de señalización específicas de antígeno en las células T estimuladas. En el desarrollo de vacunas contra enfermedades producidas por parásitos intracelulares, se recomienda el esclarecimiento de los mecanismos moleculares asociados, particularmente la identificación de péptidos (epítopes de células T. que puedan estimular un RCT dado, es primordial. En este sentido, en nuestro laboratorio consideramos la posibilidad de identificar péptidos naturales de Leishmania spp. capaces de estimular subpoblaciones de células T productoras de citocinas asociadas con protección de la enfermedad. Como primer paso, utilizamos un método descrito por Malik y Strominger (2000., con algunas modificaciones para aislar complejos CMH/II-péptidos. Para este propósito, se infectó una línea celular de monocitos humanos con promastigotes de Leishmania brasiliensis y los complejos expresados se purificaron por cromatografía de inmunoafinidad y se fraccionaron por RT-HPLC. Las fracciones de péptidos obtenidas se analizaron para determinar su capacidad de estimular una respuesta proliferativa de células T y secreción de citocinas. Los resultados obtenidos con células mononucleares de sangre periférica (CMSP. de pacientes infectados con Leishmania, mostraron reactividad importante con dos de las fracciones de péptidos ensayadas, mientras el resto de las fracciones fueron incapaces de inducir estimulación celular con la estrategia utilizada.

ABSTRACT

The ability of macrophages to process and present Leishmania antigens is thought to be needed for their efficient interaction with effector T cells and locally-delivered cytokines which induce a leishmanicidal activity. T cell receptors (TCR) recognize antigenic peptides associated with the major histocompatibility complex (MHC) molecules, and this trimolecular interaction initiates antigen-specific signaling pathways in the responding T cells. In the development of vaccines for intracellular parasitic diseases, it is of pivotal importance the elucidation of the immunological mechanisms associated with them, particularly, the identification of peptides (T cell epitopes) that can stimulate a given TCR. Thus, we considered the possibility of identifying natural Leishmania spp peptides able to stimulate T cell subpopulations that produce a pattern of cytokines associated with disease protection. As a first step in the study, we used a method described by Malik and Strominger (2000), with significant modifications to isolate CMH/II-peptide complexes. For this purpose, a cell line of human monocytes were infected with promastigotes Leishmaniabraziliensis, and the expressed complexes were purified by immunoaffinity chromatography, and fractionated by RT-HPLC. The HPLC fractions obtained were tested for their capacity to stimulate a T cell proliferative response and cytokine secretion. Results obtained from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from Leishmania-infected patients showed an important reactivity with two of the fractions tested, while the rest of the fractions were unable to induce cell stimulation with the strategy used.