Optimización de la técnica de PCR reversa para la detección del VIH en plasma de pacientes infectados / Optimization of the reverse PCR technique for HIV detection in plasma of infected patients

RESUMEN

Aunque la técnica convencional para el diagnóstico del VIH es la PCR a partir de ADN proviral, la técnica RT-PCR cualitativa podría constituir una herramienta de apoyo en el diagnóstico del VIH en pacientes infectados, ya que una de sus principales ventajas es el uso de muestras de plasma, en lugar de sangre total, lo cual facilitaría su transporte entre las distintas regiones del país. En este estudio se planteó como objetivo evaluar las condiciones óptimas, en cuanto al uso de cebadores y enzima transcriptasa reversa, para síntesis de ADN complementario (RT-PCR) de la región de envoltura del VIH, a partir de muestras de plasma de pacientes VIH positivos. Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que la utilización de cebadores azarosos, en una mezcla de reacción con la enzima RT “SuperScript” TM (200 U/mL), permite maximizar la eficiencia de amplificación del gen de la envoltura de VIH-1, en comparación con cebadores específicos. Esto permite ofrecer una alternativa metodológica a partir de muestras de plasma, para la detección del VIH en aquellas personas que por diversas razones no pueden trasladarse a la institución de referencia.

ABSTRACT

Even though PCR is the conventional technique for HIV diagnosis in proviral DNA, the qualitative RT-PCR technique could constitute a support tool for HIV diagnosis in infected patients since one of its main advantages is the use of plasma samples instead of whole blood, which facilitates its transportation from the various regions of the country. The main objective of this study was the evaluation of the optimal conditions regarding use of primers and reverse transcriptase enzyme, for the synthesis of complementary DNA (RT-PCR) of the HIV sheath in plasma samples of HIV positive patients. The results obtained in this study suggest that the use of random primers, in a reactive mixture with the RT “SuperScript” enzyme TM (200 U/mL), allows maximizing the amplifying efficiency of the HIV-1 sheath gene, as compared with specific primers. This offers a methodological alternative using plasma samples for HIV detection in those persons who due to various reasons cannot travel to the reference institution.