Determinação da susceptibilidade aos fármacos antifúngicos de amostras do complexo de espécies de Candida parapsilosis isoladas de pacientes com fungemia / Determination of antifungal susceptibility of samples of Candida parapsilosis complex species isolated from patients with fungemia

RESUMO

Dentre as espécies de Candida não-albicans, Candida parapsilosis vem emergindo como importante patógeno de infecções fúngicas invasivas com disseminação hematogênica nas últimas décadas em diferentes continentes, principalmente, na Europa e na América Latina. C. parapsilosis foi considerada por muito tempo um complexo de três grupos distintos nomeados I, II e III. Tavanti et al (2005), baseado na tipagem da sequência multilocus (MLST), propôs o reconhecimento dos grupos II e III, como duas novas espécies: C. orthopsilosis e C. metapsilosis, respectivamente, mantendo o grupo I como C. parapsilosis stricto sensu. Até agora só tem sido possível distinguir essas três espécies por análise molecular. Métodos comerciais para testes de susceptibilidade aos antifúngicos vêm sendo utilizados para avaliar o comportamento de Candida spp. frente às drogas de uso clínico, incluindo o Etest® e o sistema Vitek® 2. Neste trabalho, estes dois métodos foram comparados ao método de referência de microdiluição em caldo pelo CLSI (M27-A3) para determinar a susceptibilidade in vitro de isolados clínicos do complexo psilosis aos fármacos antifúngicos anfotericina B, fluconazol, voriconazol e itraconazol. Um total de 53 isolados do complexo psilosis oriundos de hemoculturas obtidas de pacientes hospitalizados no município do Rio de Janeiro, entre 1998 e 2006, associados a episódios de fungemia, foram analisados. Cinquenta e um isolados foram discriminados pela PCR, utilizando primers espécie-específicos, e dois isolados, pelo sequenciamento, sendo caracterizados como C. parapsilosis stricto sensu (75,4 porcento), C. orthopsilosis (20,8 porcento) e C. metapsilosis (3,8 porcento). Os testes de susceptibilidade aos antifúngicos indicaram que a maioria dos isolados de C. parapsilosis stricto sensu foi sensível a todos os fármacos testados. Entretanto, um único isolado de C. parapsilosis stricto sensu apresentou uma CIM = 2 [g/mL para a anfotericina B. Três isolados de C. orthopsilosis apresentaram CIM entre 2 e 8 [g/mL para o fluconazol pelo Etest® e Vitek® 2 e CIM entre 0,19 e 0,25 [g/mL para o itraconazol pelo Etest®. Os isolados de C. metapsilosis foram sensíveis a todos os fármacos testados. A concordância essencial entre Etest® ou Vitek® 2 com CLSI foi excelente (100 porcento), exceto para o itraconazol (90,9 porcento). Por outro lado, a concordância categórica foi 72,7 porcento para o itraconazol pelo Etest® e 100 porcento para os outros fármacos por ambos os métodos. Para anfotericina B, a concordância categórica foi de 100 porcento para o Etest® e de 97,5 porcento pelo Vitek® 2 em relação ao CLSI. Este estudo reforça a importância dos métodos Etest® e Vitek® 2 que podem ser empregados nos laboratórios rotineiros de microbiologia clínica para monitorar e detectar diferenças no perfil de susceptibilidade aos antifúngicos dos isolados de C. parapsilosis stricto sensu, C. orthopsilosis e C. metapsilosis.

ABSTRACT

Among non-albicans Candida species, Candida parapsilosis has emerged as an important agent of invasive fungal infections, and several cases associated with fungemia have been reported worldwide in last decade, mostly in Europe and Latin America. For many years, C. parapsilosis has been characterized as a complex composed of three genetically distinct groups (groups I, II, and III). Tavanti et al. (2005) based on multilocus sequence typing (MLST) technique, proposed the recognition of groups II and III as two different species: C. orthopsilosis and C. metapsilosis, respectively, maintaining the group I as C. parapsilosissensu stricto. Up to now only has been possible to distinguish these three species just by molecular analysis. Commercial antifungal susceptibility methods including Etest® and Vitek® 2 system have been used to test the antifungal susceptibility of Candida spp. In this study, these methods were compared to the CLSI broth microdilution (BMD) reference method to determine in vitro susceptibility of clinical C. parapsilosis complex isolates to amphotericin B, fluconazole, voriconazole, and itraconazole. A total of 53 C. parapsilosis complex isolates from blood cultures obtained of patients who were hospitalized in the city of Rio de Janeiro between 1998 and 2006 associated with episodes of fungemia were analysed. Fifty-one isolates were discriminated by PCR using species-specific primers and two isolates by sequencing, being characterized as C. parapsilosis sensu stricto (75.4 percent), C. orthopsilosis(20.8 percent), and C. metapsilosis (3.8 percent). Antifungal susceptibility tests indicated that most of C. parapsilosis sensu stricto isolates were susceptible to all tested drugs. However, a single C. parapsilosis sensu stricto isolate presented MIC = 2 µg/ml for amphotericin B. Three C. orthopsilosis isolates showed MIC between 2-8 µg/ml for fluconazole by Vitek® 2 and MIC between 0.19-0.25 µg/ml for itraconazole by Etest®. C. metapsilosis isolates were susceptible to all tested drugs. The essential agreement between the Etest® or Vitek® 2 with the CLSI BMD for all drugs was excellent (100 percent), except for itraconazole (90.9 percent). The categorical agreement was 72.7 percent for itraconazole by Etest®, 97.5 percent for amphotericin B by Vitek® 2, and 100 percent for the other drugs by both methods compared with CLSI BMD. This study reinforces the importance of Etest® and Vitek® 2 methods in routine clinical microbiologycal laboratories to survey and detect differences in the profile of the antifungal susceptibility of C. parapsilosis sensu stricto, C. orthopsilosis, and C. metapsilosis isolates.