Investigation of virulence factors of Enterococcus faecalis strains isolated in secondary/ persistent infections / Investigação de fatores de virulência de estirpes de Enterococcus faecalis isoladas em infecções secundárias persistentes

ABSTRACT

More virulent strains may result from the acquisition of genes by genetic exchange, pathogenicity islands in several species encoding toxins, adhesion factors and other factors associated with virulence. The aim of this study was to investigate the prevalence of E. faecalis strains in secondary endodontic/ persistent using endodontic infection by culture and PCR technqiues; and to investigate for the presence of virulence factor genes of gelatinase (gelE), cytolysin activator (Cyla), surface adhesion of Enterococcus (ESP) and collagen adhesin of Enterococcus (ACE). Material and methods: Microbial samples were obtained from 12 teeth with secondary/ persistent endodontic infection showing apical periodontitis. Culture techniques were used including serial dilution, plating, incubation, and biochemical identification. For PCR detection, samples were analyzed using a species-specific primer of the 16S rDNA and the downstream intergenic spacer region. Results: Culture and PCR detected the test species in 3/12 (25%) and 5/12 (41.6%) of teeth,respectively. A total of 38 Enterococcus faecalis strains were isolated and submitted to the virulence factor genes analysis. PCR products consistent with genes encoding surface adhesion (ESP), gelatinase (gelE) and collagen binding antigen (ACE) were found in 26/38 (68%), 31/38 (81%) and 38/38 (100%) of the isolates. The Cytolysin activator (Cyla) gene was not recovered from E. faecalis isolates. Conclusions: In conclusion, the present study revealed by culture and molecular methods revealed a high prevalence of E. faecalis in teeth with secondary/ persistent endodontic infection. Moreover, of a clinical relevance, we found different E. faecalis strains carrying different virulence determinants.

RESUMO

Objetivos: O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de cepas de E. faecalis em canais com infecções endodônticas secundárias/persistentes por meio de cultura e PCR, além de analisar a presença de fatores de virulência genéticos como gelatinase (gelE), ativador de citolisina (Cyla), adesina de superfície (ESP) e adesina de colágeno (ACE). Material e métodos: Foram coletadas amostras de 12 canais radiculares com infecção endodôntica secundária/persistente e presença de lesão periapical. Para a cultura microbiológica foi realizada diluição em série, incubação e identificação bioquímica dos microrganismos, enquanto que no PCR as amostras foram analisadas através de primers específicos 16S rDNA. Os casos com presença de Enterococcus faecalis foram selecionadas para realização de análise quanto aos fatores de virulência gelE, Cyla, ESP e ACE. Resultados: Enterococcus faecalis foi detectado através de cultura e PCR em 3/12 (25%) e 5/12 (41,6%) dos casos, respectivamente. No total, foram isoladas 38 amostras com presença de E. faecalis. Os produtos de PCR consistentes com os genes ESP, gelE e ACE foram encontrados em 26 /38 (68%), 31 /38 (81%) e 38/38 (100%) dos isolados. Cyla não foi recuperado a partir de E. faecalis em nenhum dos isolados. Conclusões: O presente estudo revelou alta prevalência de E. faecalis em dentes com infecção endodôntica secundária/ persistente. Estes microrganismos apresentaram elevado índice de diferentes fatores de virulência.