Determinación cualitativa de algunos metabolitos de seis glucocorticoides en orina a través de cromatografía líquida de alta eficiencia acoplada a masas-masas. / Qualitative determination of metabolites in urine of six glucocorticoids by high performance liquid chromatography coupled to mass-sprectrometry

RESUMEN

El uso de glucocorticoides está prohibido en el campo deportivo durante las competencias si son administrados por vías sistémicas, para lo cual, WADA definió un nivel de reporte de 30ng/mL para los compuestos padre y sus metabolitos. En este trabajo ha sido desarrollada una metodología analítica para la determinación cualitativa de los principales metabolitos de algunos glucocorticoides sintéticos Betametasona, Budesonida, Dexametasona, Metilprednisolona, Prednisolona, y Triamcinolona Acetónido, presentes en muestras de orina conservadas por el Laboratorio de Control al Dopaje de COLDEPORTES. La metodología incluyó una comparación entre la extracción de los analitos libres y conjugados con glucurónido (para determinar cuál de las dos fracciones era más útil en el análisis de estas sustancias), su separación por cromatografía liquida de alta eficiencia con ionización positiva y la detección por medio de trampa iónica (HPLC-MS-MS). Se seleccionaron los metabolitos mayoritarios a través de sus tiempos de retención, posteriormente se fragmentaron para obtener sus espectros y a través de la abundancia se determinó la cantidad presente en cada fracción (libre y conjugada). Se identificaron los seis glucocorticoides y un total de doce metabolitos, que permitirán hacer un rastreo más prolongado del consumo de las sustancias. Además se confirmó que las cantidades para la mayoría de los compuestos de interés, fueron más altas en la fracción libre de las muestras de orina, pero que no es posible eliminar el proceso de hidrolisis porque algunos metabolitos se excretan conjugados.

ABSTRACT

Glucocorticoids use is prohibited on the sport during competitions when they are administered by systemic routes for which WADA defined a reporting level of 30ng/ml for parent compounds and their metabolites. In this paper has been developed an analytical methodology for the qualitative determination of the main metabolites of some synthetic glucocorticoids Betamethasone, Budesonide, Dexamethasone, Methylprednisolone, Prednisolone and Triamcinolone Acetonide, present in urine samples preserved by the Laboratory of Doping Control of COLDEPORTES. The methodology included a comparison between the extraction of free and conjugated with glucuronide analytes (to determine which of the two fractions was more useful in the analysis of these substances), their separation by high performance liquid chromatography with positive ionization and detection using ion trap (HPLC -MS- MS). Major metabolites were selected by their retention times, later fragmented to obtain its spectra and through their abundance determine the amount present in each fraction (free and conjugated). There were identified the six glucocorticoids and twelve metabolites, that will allow to make a more extended screening of the consumption of these substances. Also it was confirmed that the amounts for most of the compounds of interest, were higher in the free fraction of the urine samples, but it is not possible to eliminate the hydrolysis process because some metabolites are excreted as conjugates.