Producción a nivel de laboratorio de Clostridium septicum IRP15 para la formulación de una vacuna veterinaria / Laboratory production of Clostridium septicum IRP15 for the formulation of a veterinary vaccine

RESUMEN

Objetivo: establecer las condiciones de producción a nivel de laboratorio de la alfa toxina de Clostridium septicum IRP15 para la formulación de una vacuna veterinaria y la optimización del proceso de producción. Métodos: se caracterizó y estandarizó la edad apropiada del inóculo para los cultivos en un fermentador New Brunswick Scientific 7 L. Las condiciones de cultivo fueron cepa C. septicum IRP15, medio de cultivo VBH, 5 L/vaso de 7 L, inóculo de 250 mL (5 por ciento), 37 ºC, 24 h, bajo agitaciones prueba de 0, 25 y 50 r.p.m. Se estableció el perfil cinético morfológico, de biomasa, consumo de sustrato y producción de toxina. Resultados: para las fermentaciones de 0 y 25 r.p.m. no se presentó fase de adaptación; el microorganismo creció de manera exponencial hasta las 4 y 6 h de fermentación, consumiendo simultáneamente la mayor cantidad de glucosa presente en el medio. A partir de estas horas y hasta las 24, se realizó la prueba de DL50 en ratones y se destaca que a 25 r.p.m. se obtuvo el mayor título de toxina (1/23). En las fermentaciones a 50 r.p.m. se observó que el microorganismo experimenta una fase de adaptación de 4 h aproximadamente; con un retardo en producción de biomasa, consumo de glucosa y producción de toxina, condición que no resulta óptima para la producción del antígeno. Conclusiones: la producción de toxina se presenta en la fase logarítmica y durante la fase estacionaria, asociándose así al crecimiento y al fenómeno de esporulación(AU)

ABSTRACT

Objective: to set the laboratory production conditions of Clostridium septicum IRP15 alpha toxin for the formulation of a veterinary vaccine and the optimization of the productive process. Methods: the appropriate inoculum age for the cultures was characterized and standardized in a 7L New Brunswick Scientific biorreactor. The conditions of culturing were C. septicum IRP15 strain, VBH medium at 5 L/7 L glass, 250 mL (5 percent) inoculum, 37 ºC, and 24 h under shaking conditions of 0, 25 y 50 r.p.m. The following kinetic parameters were monitored morphological changes, biomass production, glucose consumption and toxin production. Results: for the shaking conditions at 0 and 25 r.p.m., C. septicum did not show an adaptation phase growth. The bacteria kept growing at the log phase up to 4-6 hours of fermentation respectively, thus consuming the highest amount of glucose from the medium. As from the growth phase hours till the 24 h of cultivation, the 50 percent lethal dose (LD50) in mice assay was conducted and at 25 r.p.m. condition, the best titre of toxin was reached (1/23). The cultures at 50 r.p.m. condition showed that the bacteria experienced adaptation phase for almost four hours, resulting in delayed biomass production, glucose consumption and toxin production. These results suggested that 50 r.p.m. is not useful for the antigen production. Conclusions: the toxin production occurred at the log phase and during the stationary phase, thus it is associated to growth and to sporulation(AU)