Detección de la mutación V617F del genJAK2 mediante análisis de disociación de alta resolución / Detection of V617F mutation of JAK2 gene by high resolution melting / Detecção da mutação V617F do gene JAK2 através da análise de dissociação em alta resolução

RESUMEN

La Policitemia Vera (PV), la Trombocitemia Esencial (TE) y la Mielofibrosis Primaria (MP) son neoplasias mieloproliferativas caracterizadas por una proliferación excesiva de una o más líneas mieloides. En el año 2005 se identificó una mutación somática en el gen Janus kinase 2 (JAK2), que resulta en el reemplazo en la proteína de una fenilalanina por una valina en la posición 617 (JAK2 V617F). Esta mutación se encuentra en el 95% de pacientes con PV, y en la mitad de los casos de TE o MP. Se han descripto metodologías que permiten identificar esta mutación dentro de las más utilizadas se encuentran la ARMS PCR (del inglés Amplification Refractory Mutation System PCR), la secuenciación y recientemente la HRM (High Resolution Melting). En este trabajo se estudió la detección de JAK2 V617F en muestras de pacientes con desórdenes mieloproliferativos mediante HRM, determinando especificidad y sensibilidad de la misma, comparándola con la ARMS PCR y la secuenciación. Los resultados demostraron que la técnica de HRM es superior a la secuenciación y equivalente a la ARMS PCR. Las metodologías sensibles y específicas para la detección de JAK2 V617F, en pacientes con neoplasias mieloproliferativas, son de gran importancia a nivel diagnóstico ya que permiten diferenciar entre desórdenes neoplásicos y condiciones reactivas.

ABSTRACT

Polycythemia Vera (PV), Essential Thrombocythemia (TE) and Primary Myelofibrosis (MP) are myeloproliferative neoplasias characterized by excessive proliferation of one or more myeloid lines. In 2005, a somatic mutation was identified in the Janus kinase 2 gene (JAK2), resulting in the replacement of a phenylalanine in the protein for a valine at position 617 (JAK2 V617F). This mutation was found in 95% of patients with PV, and in half of the cases of TE or MP. Different methodologies have been described to identify this mutation the most used are ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System PCR), sequencing and recently HRM (High Resolution Melting). In this work, detection of JAK2 V617F was studied in samples from patients with myeloproliferative disorders using HRM, determining its specificity and sensitivity in comparison with ARMS PCR and sequencing. The results showed that the technique is superior to sequencing and equivalent to ARMS PCR. Sensitive and specific methodologies for the detection of JAK2 V617F in patients with myeloproliferative neoplasias are of great importance at diagnostic level since they can differentiate between neoplastic disorders and reactive conditions.

RESUMO

Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose Primária (MP) são neoplasias mieloproliferativas caracterizadas por uma proliferação excessiva de uma ou mais linhas mieloides. Em 2005, uma mutação somática foi identificada no gene Janus quinase 2 (JAK2), resultando na substituição na proteína de uma fenilalanina para uma valina na posição 617 (JAK2 V617F). Esta mutação é encontrada em 95% dos pacientes com policitemia vera, e na metade dos casos de TE ou MP. Foram descritas metodologias para identificar esta mutação dentre as mais utilizadas estão ARMS PCR (Amplification Refractory Mutation System PCR), sequenciamento e, recentemente, HRM (High Resolution Melting). Neste trabalho a detecção de JAK2 V617F foi estudada em amostras de pacientes com neoplasias mieloproliferativas usando HRM, determinando a sensibilidade e especificidade da mesma, comparando-a com a ARMS PCR e o sequenciamento. Os resultados mostraram que a técnica de HRM é superior ao sequenciamento e equivalente à ARMS PCR. Sensíveis e específicas para a detecção de JAK2 V617F em pacientes com neoplasias mieloproliferativas, as metodologias são de grande importância em nível de diagnóstico, uma vez que permitem diferenciar entre doenças neoplásicas e condições reativas.