Determinación de clorhidrato de nafazolina por cromatografía líquida de alta resolución en una solución oftálmica / Naphazoline hydrochloride assay by high performance liquid chromatography in an ophthalmic solution

RESUMEN

Introducción: la Farmacopea de los Estados Unidos orienta cómo valorar clorhidrato de nafazolina en una solución oftálmica, pero indica el uso de una columna con grupos nitrilos unidos a sílice porosa, de uso poco frecuente. Objetivo: desarrollar y validar un método alternativo por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) para la cuantificación de clorhidrato de nafazolina en una solución oftálmica. Métodos: el método desarrollado fue de separación isocrática con columna Zorbax SB-C18 (4,6 x 150 mm, 5 µm) y detección ultravioleta a 225 nm. Como fase móvil se empleó solución amortiguadora y acetonitrilo (proporción 8515, v/v) y la solución amortiguadora fue de KH2PO4 (22 mM) y trietilamina (30 mM), ajustada a pH 3 con ácido fosfórico concentrado. La validación del método se realizó siguiendo las indicaciones de la Guía Q2(R1) de la Conferencia Internacional sobre la Armonización. Se evaluaron los parámetros siguientes especificidad, precisión, exactitud, linealidad y rango. También se determinó la incertidumbre del método. Resultados: en la especificidad, el placebo no tuvo señal en la zona de clorhidrato de nafazolina; los coeficientes de variación obtenidos para la precisión intermedia resultaron inferiores a 1,5 por ciento; en la exactitud el recobrado fue de 101,52 por ciento y en la linealidad se demostró la ausencia de curvatura en el intervalo 50 a 150 por ciento. La incertidumbre expandida calculada fue un 3 por ciento de la cantidad declarada. Conclusiones: todos los parámetros de validación evaluados se encuentran dentro los límites de aceptación establecidos, por lo que el método es adecuado para los fines propuestos(AU)

ABSTRACT

Introduction: the United States Pharmacopeia specifies how to titer naphazoline hydrochloride in an ophthalmic solution, but suggests the use of a column with nitrile groups attached to porous silica which is barely used. Objective: to develop and to validate an alternative method by high resolution liquid chromatography for the quantification of naphazoline hydrochloride in an ophthalmic solution. Methods: the developed method was isocratic separation with a Zorbax SB-C18 column (4.6 x 150 mm, 5 µm) and ultraviolet detection set at 225 nm. The mobile phase was buffer and acetonitrile (8515 ratio, v/v) and the buffer was KH2PO4 (22 mM) and triethylamine (30 mM), adjusted to pH 3 with concentrated phosphoric acid. The validation method was performed pursuant to the Guide Q2(R1) of the International Conference on Harmonization and the following parameters were evaluated specificity, precision, accuracy, linearity and range. The method uncertainty was also estimated. Results: regarding the specificity, the placebo did not show any signal in the naphazoline hydrochloride zone; the relative standard deviation indexes for intermediate precision were less than 1.5 percent; as to accuracy, the recovery was 101.52 percent and the linearity showed absence of curvature in the 50 to 150 percent range. The estimated expanded uncertainty reached 3 percent of the stated amount. Conclusions: all the validation parameters under evaluation were within the set allowable limits, thus this method is suitable for the intended purposes(AU)