Determination of amphotericin B in PLA-PEG blend nanoparticles by HPLC-PDA

ABSTRACT

In this work, we developed and validated an effective reversed-phase HPLC method with photodiode array (PDA) detection for the quantitative analysis of amphotericin B (AmB) in poly(lactide)-poly(ethylene glycol) (PLA-PEG) blend nanoparticles. Chromatographic runs were performed on a reverse phase C18 column using a mobile phase comprising a 9% acetic acid and acetonitrile mixture (4060, v/v) under isocratic elution with a flow rate of 1 mL/min. AmB was detected at a wavelength of 408 nm. The validation process was performed considering the selectivity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) of the method. A concentration range of 1-20 µg/mL was used to construct a linear calibration curve. The LOQ and LOD were 55 and 18 ng/mL, respectively. The mean recovery of AmB from the samples was 99.92% (relative standard deviation (RSD) = 0.34%, n=9), and the method was robust for changes in the flow rate of the mobile phase (maximum RSD=4.82%). The intra- and inter-assay coefficients of variation were less than 0.59%. The method was successfully used to determine the entrapment efficiency of AmB in PLA-PEG blend nanoparticles.

RESUMO

Neste trabalho desenvolveu-se e validou-se um efetivo método por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em fase reversa com detecção por fotodiodos para a análise quantitativa de anfotericina B (AmB) em nanopartículas compostas por blendas de poli(ácido lático)-polietilenoglicol (PLA-PEG). Corridas cromatográficas foram realizadas sob coluna C18 de fase reversa com fase móvel consistindo de ácido acético 9% e acetonitrila (4060, v/v), em eluição isocrática com fluxo de 1 mL/min. A AmB foi detectada no comprimento de onda de 408 nm. O processo de validação foi realizado considerando a seletividade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção (LD) e limite de quantificação (LQ) do método. Uma faixa de concentração entre 1-20 µg/mL foi usada para obter a curva-padrão linear. Os valores de LD e LQ foram 55 e 18 ng/mL, respectivamente. A recuperação média da AmB a partir das amostras foi de 99,92% (desvio padrão relativo = 0,34%, n=9) e o método foi robusto, considerando alterações no fluxo da fase móvel (desvio padrão relativo máximo=4,82%). Os coeficientes de variação intra e inter dia foram inferiores a 0,59%. O método foi utilizado com sucesso para a determinação da eficiência de encapsulação da AmB em nanopartículas de PLA-PEG.