Identificação do polimorfismo no receptor para TNF-alfa (TNFR1 posição +36A/G) e sua expressão em lesões de colo uterino / Identification of TNF-alfa polymorphism (TNFR1+36A/G) and its expression in uterine cervix lesions

RESUMO

A infecção pelo HPV é o principal fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma cervical. Contudo, a maioria das mulheres permanece assintomática, desenvolvendo lesões intraepiteliais de baixo e alto grau. Estudos demonstram que polimorfismos nas regiões promotoras de genes de citocinas estão associados com a gravidade de muitas doenças infecciosas. Dentre estas, podemos citar a citocina pró-inflamatória TNF-alfa, onde suas atividades celulares são mediadas pela interação entre a citocina e seus receptores (TNFR1 e R2). Assim, tivemos como objetivo neste estudo, identificar polimorfismos dos receptores de TNF-alfa associar ao aparecimento e progressão da lesão cervical, além de avaliar a expressao da proteína TNFR1 em lesoes cervicais. As técnicas de PCR e RFLP foram realizadas para identificar o polimorfismo de base única (SNP) do gene TNFR1 na posição +36A/G. Para a expressão da proteína foi realizada a imunohistoquimica em fragmentos de tecido parafinado provenientes de lesões cervicais e histerectomias (controle)Foram incluídas 365 mulheres neste estudo, sendo 183 pacientes e 182 controles. O genótipo AA TNFR1+36A/G foi associado com a proteção ao desenvolvimento de lesões de baixo grau (p=0,03) Para a análise da expressão de TNFR1, foram selecionadas 46 mulheres (17 controles, 15 HSIL e 14 LSIL). Foi observado um aumento na expressão deste receptor em células inflamatórias no corion de mulheres portadores de HSIL quando comparadas com o grupo controle (p=0,001). Ao associarmos os genótipos com a expressão da proteina, foi observado que portadoras de TNFR1+36AA não apresentam alterações na expressão TNFR1 independente do grau de lesão cervical. Assim, a presença de TNFR1 pode estar sendo modulada negativamente pela infecção por HPV e este marcador pode ser utilizado como indicador para a progressão de lesões pré-malignas cervicais.

ABSTRACT

HPV infection is the main risk factor for development of cervical carcinoma. However,most women remain asymptomatic, developing high grade and low intraepitheliallesions. Studies demonstrated that polymorphisms in promoter regions of cytokinesgenes are associated with the severity of many infectious diseases. Among these, wemention the proinflammatory cytokine TNF-alfa, where their cellular activities aremediated by cytokine and their receptors (TNFR1 and R2) interaction. Thus, in thisstudy, we have the aim to identify TNF-alfa receptors polymorphisms and associate withthe onset and progression of cervical lesions, and to evaluate the TNFR1 expression incervical lesions. PCR and RFLP techniques were performed to identify the single basepolymorphism (SNP) TNFR1 gene at position +36 A/G. For protein expression, it wasperformed immunohistochemistry on paraffin tissue fragments from cervical lesionsand hysterectomies (control). Three hundred and sixty five women were included, 183patients and 182 controls. The AA genotype TNFR1 +36 A /G was associated withprotection from developing low-grade lesions (p = 0.03) for the analysis of TNFR1expression, we selected 46 women (17 controls, 15 HSIL and 14 LSIL). It wasobserved an increase in the receptor expression on inflammatory cells from corion ofHSIL women when compared with the control group (p = 0.001). By associatinggenotypes with expression of the protein, it was observed that carriers of TNFR1 +36AA did not show changes in the TNFR1expression, independent cervical lesion degree.Thus, the TNFR1 presence may be negatively being modulated by HPV infection andthis marker can be used as an indicator of premalignant cervical lesions progression.