Uso de técnicas moleculares na detecção de DNA parasitário e no estudo da variabilidade genética em diferentes fragmentos teciduais de cães naturalmente infectados por Leishmania (Viannia) braziliensis / Use of molecular techniques in parasite DNA detection and genetic variability study in different tissue fragments from naturally infected dogs by Leishmania (Viannia) braziliensis

RESUMO

A leishmaniose tegumentar americana (LTA), em cães, costuma estar associada à resposta humoral baixa ou mesmo negativa, o que inviabiliza os métodos sorológicos convencionais, como ferramenta única no diagnóstico. [...] Métodos convencionais de diagnóstico parasitológico, não têm sido capazes de detectar a presença do parasito em outros sítios anatômicos diferentes da lesão cutânea, em cães naturalmente infectados por Leishmania (Viannia) braziliensis. Diante dos questionamentos sobre o papel do cão doméstico no ciclo de transmissão da LTA e sobre o valor de métodos diagnósticos aplicados na rotina, principalmente em áreas de sobreposição da forma tegumentar e visceral, faz-se necessário a avaliação desses animais sob diversos aspectos. O presente estudo teve como objetivo empregar a PCR específica associada à hibridização molecular e a técnica da reação em cadeia da polimerase com primer único em condições de baixa estringência (LSSP-PCR) visando detectar a presença de DNA parasitário e investigar a variabilidade genética de populações parasitárias presentes em diferentes tecidos de cães naturalmente infectados por L. (V.) braziliensis. Os animais foram selecionados entre os cães sororeatores para Leishmania procedentes de cidades do estado do Rio de Janeiro e encaminhados para eutanásia ao Laboratório de Pesquisa Clínica em Dermatozoonoses em Animais Domésticos do Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas da Fundação Oswaldo Cruz. Durante a necropsia, foram obtidas amostras de lesão cutânea, pele íntegra (região escapular e abdominal), baço, fígado e linfonodos (poplíteo e cervical)...

ABSTRACT

In dogs, American tegumentary leishmaniasis (ATL) is usually associated to a low humoral responseor even to negative results which turns not unfeasible the conventional serological methods. [...] Conventional methods ofparasitological diagnosis have failed to detect the presence of the parasite anatomic sites others thanthe cutaneous lesion, in dogs naturally infected by Leishmania (Viannia) braziliensis. Regarding thequestions on the rule of domestic dogs in the transmission cycle of ATL and, on the applicability ofdiagnostic methods mainly in areas where both visceral and tegumentary disease are found, theevaluation of these animals under different aspects is needed. The objective of this project is to applyspecific PCR assays associated to molecular hybridization and the technique of Low-StringencySpecific-Single Primer – PCR (LSSP-PCR) in order to detect the presence of parasite DNA andevaluate the genetic variability of parasite populations found in different tissues of dogs naturallyinfected by Leishmania (V.) braziliensis...