Análise Temporal dos Transcritos dos Genes bdnf e ntrk2 em Cérebro de Zebrafish Induzido à Crise Epiléptica por Pentilenotetrazol / Temporal transcript profile of bdnf, ntrk2a and ntrk2b genes in zebrafish brain after Pentylenotetrazole (PTZ)-induced seizure

RESUMO

Objetivo: Investigar o perfil temporal de transcritos dos genes bdnf, ntrk2a e ntrk2b em cérebro de zebrafish após crise epiléptica induzida por Pentilenotetrazol (PTZ). Metodologia: Os animais foram divididos em Grupo PTZ (induzidos à crise epiléptica com PTZ 15mM) e Grupo Controle (animais sem crise epiléptica) e seus cérebros coletados nos tempos 0h, 12h, 24h, 48h, 72h pós-crise. Reações de transcriptase reversa-PCR quantitativa foram realizadas com os controles endógenos 18s e ef1a usando-se o sistema TaqManTM (Applied Biosystems, Foster City). A quantificação relativa foi calculada pela equação QR=2–∆∆CT e a significância estatística dada pelo teste Kruskall-Wallis (p≤0,05). Resultados: No grupo PTZ houve um aumento significativo dos niveis de RNAm do gene bdnf no tempo 0h (p=0,017). O aumento de transcritos encontrado nos outros tempos não foi significante (p>0,05). Conclusão: Nossos resultados mostraram que a indução de crise epiléptica alterou o padrão de transcrito do gene bdnf no cérebro do zebrafish como visto em outros modelos animais e em humanos, porém em um padrão temporal diferente. Este é o primeiro estudo que descreve o perfil temporal de transcritos bdnf/ntrk2 em cérebro de zebrafish após crise epiléptica e contribui para a caracterização deste pequeno peixe como modelo de estudo em epilepsias.

ABSTRACT

Objective: The main aim of this study was to investigate the transcript profile of bdnf, ntrk2a and ntrk2b genes in adult zebrafish brain after Pentylenotetrazole (PTZ)-induced seizure. Methods: Zebrafish were separated in PTZ (seizure-induced) and Control (no seizure) groups. At 0h, 12h, 24h, 48h and 72h after seizure, animals were anesthetized and their brains were immediately collected for RNA extraction. Reverse transcriptase quantitativePCRs were carried out with 18S and ef1a as endogenous control using TaqManTM System (Applied Biosystems, Foster City). The relative quantification was calculated by the equation RQ=2–∆∆CT. Statistical analysis was performed by Kruskall-Wallis test (p≤0.05). Results: Comparisons between both groups showed an increase of bdnf mRNA levels in the PTZ group at 0h after seizure (p= 0.017). No statistical significance was found in other times investigated (p>0.05). Conclusions: Our results showed an up-regulation of the transcript levels of bdnf gene in zebrafish brain after seizure as seems in other models and humans, but in a different pattern. This is the first study investigating temporal pattern of bdnf, ntrk2a and ntrk2b genes in zebrafish brain after a seizure and contributes to characterize it as a model for epilepsy studies.