Atuação da ocitocina no processo de diferenciação osteoblástica de ratas senis / Action of oxytocin in the process of osteoblast differentiation in senescent rats

RESUMO

Ocitocina (OT) é hormônio peptídico sintetizado no hipotálamo e armazenado na neurohipófise. A literatura evidencia atuação anabólica da OT no esqueleto de animais jovens. Em nosso laboratório estamos realizando pesquisas para estudar a ação da OT no metabolismo ósseo, durante o envelhecimento. Analisamos inicialmente o processo de remodelação óssea alveolar em ratas com 24 meses e detectamos ação importante da OT na maior formação óssea nesses animais, o que não foi observado em animais com 12 meses. Esses resultados evidenciaram a necessidade de investigação da ação da OT, visando à compreensão dos mecanismos envolvidos na maior formação óssea em organismos senis, no período caracterizado pela aciclicidade estral (estropausa – 24 meses) comparado com organismos adultos com ciclo estral regular (12 meses). Nesse estudo foi avaliada a influência da idade (12 e 24 meses) e a ação da OT associada a indutores osteogênicos clássicos durante a diferenciação em linhagem osteogênica de células-tronco mesenquimais (CTMs) a partir do estroma da medula óssea de fêmures de ratas Wistar, com 12 e 24 meses. Quatro grupos de cada idade foram formados, sendo MC (meio de crescimento); MO (meio de crescimento suplementado com indutores osteogênicos); MCO (meio de crescimento + OT); MOO (meio de crescimento suplementado com indutores osteogênicos + OT). O ensaio com vermelho de alizarina demonstrou mineralização biológica a partir do 17º dia no grupo com 12 meses em ambos os grupos osteogênicos (MO e MOO), porém a adição de OT (MOO) promoveu a mineralização a partir do 14º dia. No grupo de 24 meses não foi detectada mineralização em nenhum dia experimental no grupo MO, porém a adição de OT no meio (MOO) promoveu a mineralização a partir do 17º dia. As escalas de expressão gênica de osterix, ocitocina e receptor de ocitocina foram menores no grupo 24 meses que no grupo 12 meses, assim como as proteínas de matriz analisadas (sialoproteína óssea, osteopontina e osteocalcina)...

ABSTRACT

Peripheral oxytocin (OT) has been shown to have direct effects on the skeleton, and to provide stimulus for the activity of osteoblasts, as an anabolic factor affecting bone mass. The effects of OT can vary with age. Here we evaluated the effects of OT on the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, in 12- and 24-months-old Wistar female rats. Four treatment groups were formed for each age group control (C) (growth medium); osteogenic medium (OM); control + oxytocin (C+OT) (growth medium + oxytocin) and osteogenic medium + oxytocin (OM+OT). Alizarin Red assay was performed and in cells from 12-month-old rats mineralization was detected on day 17 in OM. However, the addition of OT to osteogenic medium (OM+OT) provided biological mineralization on day 14. In cells from 24-month-old acyclic rats, the OM subgroup showed no mineralization; in the OM+OT subgroup mineralization was detected on day 17. Osterix, matrix protein (bone sialoprotein, osteopontin and osteocalcin) and oxytocin gene expression was lower in the 24-month-old than the 12-month-old group; these proteins were increased by OT. The oxytocin receptor was up-regulated only in the 12-month-old group and PGE2 showed an increase in the OM group than in the OM + OT group in both age groups. These findings suggest that OT shows different, differentiation-dependent actions, and is important in the biological mineralization performed by osteoblasts, mainly in cells of bone marrow mesenchymal stem cells from acyclic 24-month-old rats highlighting oxytocin as a potential therapy for control of osteoporosis...