Estudo clínico-molecular na leishmaniose mucocutânea: diagnóstico e rastreamento de subpopulações de leishmania (Viannia) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes / Clinical and molecular study in mucocutaneous leishmaniasis: Diagnoses and screening of subpopulation of leishmania (Viannia) braziliensis in the inter and intrapatient levels

RESUMO

O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a diversidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes, diretamente em lesões cutâneas e mucosas de indivíduos com leishmanioses mucocutânea (LMC), disseminada (LD) e mucosa (LM), incluindo indivíduos coinfectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Um total de 61 amostras procedentes de 38 pacientes foi analisado pelas técnicas da reação em cadeia da polimerase (PCR), da reação em cadeia da polimerase com primer único em condições de baixa estringência (LSSP-PCR) e da análise fenética, tendo como alvo molecular a região variável do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA). Neste estudo, predominaram indivíduos do sexo masculino e com acometimento mucoso nasal. A presença de DNA do parasita foi evidenciada pela banda diagnóstica de 750 pb, em todas as amostras analisadas, possibilitando o diagnóstico específico. Na investigação do perfil genotípico de subpopulações de L. (V.) braziliensis, através da LSSP-PCR, foi revelado o polimorfismo genético intrafragmento traduzido como uma assinatura do kDNA do parasito para cada amostra. Assinaturas de kDNAs similares em amostras de paciente coletadas ao mesmo tempo (mucosa oral e nasal), e a divergência nos perfis genéticos em amostras coletadas em tempos diferentes na mesma localização (mucosa nasal) sugerem a clonalidade do inóculo inicial, como consequência da estrutura populacional clonal de Leishmania. No estudo da variabilidade genética de L. (V.) braziliensis nos níveis inter e intrapacientes foram evidenciadas similaridades genotípicas entre as amostras de lesões cutânea e mucosa intrapacientes. As análises fenética e estatística possibilitaram afirmar que a diversidade genética no nível intrapacientes é menor do que a observada entre os pacientes...

ABSTRACT

The present study has as its main objective to evaluate the genetic diversity of Leishmania(Viannia) braziliensis in the inter and intrapatient levels, directly from cutaneous and mucosallesions of individuals with mucocutaneous (MCL), disseminated (DL) and mucosal (ML)leishmaniasis, including individuals with the human immunodeficiency virus (HIV) infection.A total of 61 samples recovered from 38 patients was analyzed by the techniques ofpolymerase chain reaction (PCR), low-stringency single-specific-primer PCR (LSSP-PCR)and phenetic analysis, directed to the variable region of the kinetoplast DNA (kDNA)minicircles. In this study, male individuals with nasal mucosa involvement predominated. Thepresence of the parasite’s DNA was revealed by the diagnosis band of 750 bp, in all analyzedsamples, making the specific diagnosis possible. In the investigation of the genotypic profileof the subpopulations of L. (V.) braziliensis, through LSSP-PCR, it was revealed theintrafragment genetic polymorphism translated as a kDNA signature for each sample. SimilarkDNAs signatures in patient’s samples collected simultaneously (oral and nasal mucosa), andthe divergence in the genetic profiles in samples collected at different times on the samelocation (nasal mucosa) suggest the clonality of the initial inoculum, as a consequence of theclonal population structure of Leishmania. In the study of the genetic variability of L. (V.)braziliensis in the inter and intrapatient levels, genotypic similarities were observed amongthe cutaneous and mucosal lesions intrapatients...