Comparação entre amostras de pele íntegra parafinada e congelada através da reação em cadeia da polimerase - quantitativa (qPCR) no diagnóstico da leishmaniose visceral canina / Comparison between samples of paraffin and frozen intact skin by polymerase chain reaction - quantitative (qPCR) in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis

RESUMO

A leishmaniose visceral (LV) representa um importante problema de saúde pública no Brasil.Podem acometer os seres humanos e mamíferos silvestres e domésticos, sob a forma de doenças infecciosas crônicas com uma ampla gama de manifestações clínicas. O diagnóstico laboratorial é requerido para confirmar a suspeita clínica. Atualmente as técnicas moleculares baseadas na reação em cadeia da polimerase (PCR) têm demonstrado alta especificidade e sensibilidade. Na literatura existem diversos relatos da utilização da PCR com diferentes tipos de material clínico, alvos moleculares, conservação das amostras. Alguns autores consideram amostras congeladas mais vantajosas em relação às amostras fixadas em formol e em bebida sem parafina (FFPE). No entanto, muitos pesquisadores defendem a importância das amostras FFPE devido à facilidade de conservação e possibilidade de utilização da PCR em estudos retrospectivos. O objetivo desse projeto foi avaliar a acurácia da qPCR realizada em amostras de pele íntegra congelada e parafinada. Trata-se de um estudo de validação, com 50 amostras de tecido congelado e 50 de tecido parafinado, provenientes de cães da cidade de Belém-PA.De cada animal foram coletados fragmentos de pele íntegra, sendo um dos fragmentos congelado e outro conservado por parafinização. As amostras de pele íntegra analisadas foram coletadas da região escapular utilizando punch de 3 mm. A qPCR foi orientada para alvos dokDNA da espécie Leishmania infantum...

ABSTRACT

Visceral leishmaniasis (VL) is a significant public health problem in Brazil. It affects humans,wild and domestic mammals, in the form of chronic infectious disease with a wide range of clinical manifestations. Laboratory diagnosis is required to confirm the clinical suspicion ofVL. Currently, molecular techniques based on polymerase chain reaction (PCR) have shownhigh specificity and sensitivity. Some authors consider more advantageous the use of frozensamples in PCR due to the better quality of DNA, in relation to that of fixed in formalin andembedded in paraffin (FFPE) samples. However, many researchers argue describe the importance of FFPE samples, due to the facility of conservation and the possibility of usingPCR in retrospective studies. The aim of this study was to evaluate the accuracy of the quantitative polymerase chain reaction (qPCR) performed on intact frozen and FFPE skin samples. This is a validation study with 50 fresh tissue samples and 50 FFPE tissues of dogsfrom Belém-PA. From each animal fragments of intact skin were collected, being one of the frozen fragments and another saved by paraffinization. The samples analyzed were collectedfrom intact skin of the scapular region using a 3 mm punch. The qPCR was oriented targetskDNA of Leishmania infantum...