Photoinactivation of Candida albicans using methylene blue as photosensitizer / Fotoinativação de Candida albicans utilizando azul de metileno como fotossensibilizador

ABSTRACT

Objective: To evaluate the effect of photodynamic therapy in the inactivation of Candida albicans planktonic cells, using methylene blue, 150 mg/mL, as a photosensitizer. Methods: Aliquots of 100 (μg/mL of the fungal suspension in a 106 cells/mL concentration were seeded in microtiter plates with 96 wells, where the same volume of methylene blue was deposited, remaining for 5 min pre-irradiation. Then, the low power laser light was applied (wavelength 660 nm, power 100 mW and dose 426 J/cm2) for 128s using a portable semiconductor laser. Control experiments were performed without illumination and in the absence of methylene blue, and another in the presence of methylene blue without illumination and with illumination, replacing the photosensitizer by saline. In each experimental condition, serial dilutions (10-1 to 10-3) were obtained and 25 μL aliquots were seeded in Sabouraud Dextrose Agar duplicate. After this period, the number of colony forming units per milliliter (CFU/mL) was determined and the data were submitted to variance analysis and Kruskal Wallis test (p <0.05). Results: At the concentration of 150 μg/mL, and time of 5 min incubation, the reduction was significant (p˂0.05). In the absence of irradiation, methylene blue produced no reduction in CFU/mL. Conclusion: Photodynamic Therapy presented antifungal effect against Candida albicans and can be used as an adjunct to conventional treatment.

RESUMO

Objetivo: Avaliar o efeito da terapia fotodinâmica na inativação de células planctônicas de Candida albicans, empregando azul de metileno a 150 µg/mL como fotossensibilizador. Métodos: Alíquotas de 100 µg/mL da suspensão do fungo na concentração de 106 células/mL foram semeadas em placas de microtitulação com 96 poços, onde foi depositado o mesmo volume de azul de metileno, permanecendo por um período de pré-irradiação de 5 min. Em seguida, aplicou-se luz laser de baixa potência (comprimento de onda 660 nm, potência 100 mW e dose 426 J/cm2) por 128s, utilizando um Laser semicondutor portátil. Experimentos controles foram realizados, sem iluminação e na ausência de azul de metileno, outro na presença de azul de metileno sem iluminação e com iluminação, substituindo o fotossensibilizador por solução salina. De cada condição experimental, diluições em série (10-1 a 10-3) foram obtidas e alíquotas de 25 μL foram plaqueadas em duplicata em Agar Sabouraud Dextrose. Após este período, o número de unidades formadoras de colônias por mililitro (CFU/mL) foi determinado e os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Kruskal Wallis (p <0,05). Resultados: Na concentração de 150 μg/mL e tempo de 5 min de incubação, a redução foi significativa (p<0,05). Na ausência de irradiação, o azul de metileno não produziu redução de CFU/mL. Conclusão: A Terapia Fotodinâmica apresentou efeito antifúngico contra Candida albicans, podendo ser utilizada como coadjuvante ao tratamento convencional.