Análise comparativa de Leishmania guyanensis com perfis distintos de suscetibilidade ao antimonial: caracterização biológica e expressão gênica / Comparative analysis of Leishmania guyanensis strains showing distinct profiles of susceptibility to antimony: biological characterization and gene expression

RESUMO

As Leishmanioses, doenças causadas pela infecção por um protozoário intracelular, podendo ocorrerem duas formas clínicas principais Leishmaniose cutânea (LC) e Leishmaniose visceral (LV). No Brasil, a maioria dos casos de LC ocorre na região amazônica e 90 por cento destes estão associados à infecção por Leishmania (Viannia) guyanensis. O antimonial pentavalente é a principal droga utilizada contra a Leishmaniose tegumentar Americana. No entanto, há relatos de ocorrência de falha no tratamento com esta droga. Este fenômeno de falha terapêutica é complexo e dentre os vários fatores envolvidos está o fenótipo de resistência a drogas no parasito. Portanto, é de fundamental importância entender os mecanismos que levam à aquisição de resistência. Neste estudo avaliamos o comportamento biológico e a expressão gênica em dois meios de cultura distintos (RPMI eSchneider) de duas amostras isoladas de pacientes, um que obteve cura terapêutica (CT) e outro que apresentou falha ao tratamento (FT), e duas linhagens obtidas a partir da amostra CT nas quais foi induzida resistência in vitro, uma mantida sob a pressão da droga (RI com SbIII) e outra mantida sema pressão da droga (RI sem SbIII). A caracterização biológica utilizando a curva de crescimentomostrou que, em meio Schneider, as amostras atingem grande densidade de parasitos, com as faseslogarítmica e estacionária bem definidas. A amostra CT apresentou uma proliferação reduzida neste meio de cultura, se comparada com as demais amostras. Em meio RPMI a curva de crescimento mostrou uma fase logarítmica curta e uma fase estacionária mais longa e a amostra FT apresentou o menor crescimento. A análise do ciclo celular em meio Schneider corroborou o resultado da curva decrescimento, uma vez que a amostra CT apresentou maior porcentagem de parasitos em fase G1.Em meio RPMI não houve diferença nas porcentagens de parasitos nas diferentes fase do ciclo,apesar da diferença no crescimento observada na curva de crescimento...

ABSTRACT

Leishmaniasis, a disease caused by infection with an intracellular protozoan, can occur in two majorforms Cutaneous Leishmaniasis (CL) and Visceral Leishmaniasis (VL). In Brazil, most CL cases occurin the Amazon region and 90 percent of these are associated with infection with Leishmania (V.) guyanensis.Pentavalent antimony is the main drug used against American Tegumentary Leishmaniasis, however,treatment failure with this drug have been reported. This phenomenon is complex and among variousfactors involves the drug resistance phenotype of the parasite. Therefore it is essential to understandthe mechanisms that lead to the acquisition of resistance. In this study we evaluated the biologicalbehavior and gene expression in two different culture media (RPMI and Schneider) of two strainsisolated from patients, who healed after therapy (CT) and another that presented treatment failure(FT), and two strains obtained from the CT sample which in vitro resistance were induced, maintainedunder drug pressure (RI with SbIII) and one maintained without drug pressure (RI without SbIII). Thebiological characterization using the growth curve showed that among Schneider, the samples reachhigh density of parasites, with well-defined logarithmic and stationary phases. The sample CT showeda reduced growth in culture medium as compared with the other samples. In RPMI growth curveshowed a logarithmic phase short and a longer stationary phase and the sample had the lowestgrowth ft...