Mapeamento da resposta imune protetora induzida por uma vacina de DNA contendo o gene NS1 de dengue 2 / Mapping of the protective immune response induced by a DNA vaccine containing dengue NS1 gene 2

RESUMO

Alguns autores apontam a proteína NS1 de DENV como um antígeno protetor. Entretanto, ainda não se sabe ao certo o seu papel na replicação viral, bem como na indução de proteção ou patogênese. Nosso grupo vem trabalhando com as vacinas de DNA contra a dengue, testando-os em modelos murinos. Camundongos imunizados com uma vacina de DNA (pcTPANS1), que contém o gene NS1 de dengue2 (DENV2), mostraram altos níveis de anticorpos anti-NS1 e quase 100 por cento de proteçãoquando desafiados com DENV2 (4 LD50). Este projeto tem por objetivo o mapeamento da resposta imune protetora gerada pela vacina pcTPANS1. Os resultados revelaram que 50 por cento dos animais que receberam o soro de outros camundongos, previamente imunizados com o plasmídeo pcTPANS1, sobreviveram à infecção após o desafio comDENV2 (4 LD50). Entretanto quando utilizamos um segundo estoque viral com 40 LD50,todos os animais apresentaram altas taxas de mortalidade e fortes sinais clínicos dainfecção, com exceção do grupo de camundongos imunizados com a vacinapcTPANS1. Posteriormente analisamos o papel da resposta imune celular naproteção. O ensaio de depleção in vivo mostrou que todos os animais vacinados edepletados de células CD4+ morreram após o desafio com DENV2, enquanto que60 por cento dos animais depletados de CD8+ sobreviveram à infecção. Os ensaios detransferência adotiva de células T mostraram proteção somente no grupo decamundongos que receberam concomitantemente soro e linfócitos TCD4+provenientes de animais imunizados com a vacina pcTPANS1. As células obtidas dobaço de animais vacinados com o plasmídeo pcTPANS1 foram capazes de secretarIFN-gama após estímulo com o peptídeo 265AGPWHLGKL273, contido na proteína NS1 de DENV2 e descrito na literatura como específico para células TCD8+...

ABSTRACT

Nowadays,there is no commercially available vaccine against this pathogen. Some authors pointout the NS1 protein from DENV as a protective antigen, however, its role in viralreplication, as well as in the induction of protection or pathogenesis, remains stillunclear. Our group has been working with DNA vaccines against dengue testing themin murine models. Mice immunized with one DNA vaccine (pcTPANS1), which containsthe NS1 gene from dengue 2 (DENV2), showed high levels of anti-NS1 antibodies andalmost 100 percent protection when challenged with DENV2 (4 LD50). This project aims tomap the protective immune response generated by the pcTPANS1. Results showedthat 50 percent of animals that received serum from other mice, previously immunized withthe pcTPANS1, survived infection after challenge with DENV2 (4 LD50). However whenwe used a second viral stock with 40 LD50, all animals showed high mortality rates andstrong clinical signs of infection, except the mouse group immunized with thepcTPANS1 vaccine. Subsequently, we analyzed the role of the cellular immuneresponse in protection. The in vivo depletion assay showed that all vaccinated anddepleted from CD4+cells died after challenge with DENV2, whereas 60 percent of CD8+depleted animals survived infection. The assays of T cell adoptive transfer showedprotection only in the mouse group receiving concomitantly serum and CD4+ Tlymphocytes recovered from animals immunized with the pcTPANS1 vaccine.Splenocytes obtained from pcTPANS1 vaccinated animals were able to secreteIFN gama after stimulation with the peptide 265AGPWHLGKL273, present in NS1 proteinfrom DENV2 and described as specific for CD8 + T cells. We also analyzed in vivo apossible cytotoxic activity specific for this peptide...