Análise da expressão do gene TcNTPDase-1 em diferentes subpopulações e formas evolutivas de Trypanosoma cruzi / Gene expression analysis of tcntpdase-1 in the distinct subpopulation and evolutive forms of trypanosoma cruzi

RESUMO

A doença de Chagas é uma doença negligenciada causada pelo protozoßrio parasita Trypanosoma cruzi, o qual afeta cerca de 6-8 milhões de pessoas em ßreasendêmicas da América Latina. As diferentes cepas envolvidas na infecção, e suadistribuição regional, tem sido sugeridas como causa das diferentes manifestaçõesclínicas, resposta ao diagnóstico e eficßcia terapêutica. A ecto-NTPDase é umaenzima localizada na superfície externa da membrana plasmßtica do T.cruzi, quehidrolisa nucleotídeos tri e difosfatados. Estudos anteriores têm relacionado estaenzima à infectividade e virulência de tripanosomatídeos, além de sugerir um papelimportante na captação de purinas pelos parasitos. Neste trabalho avaliamos osníveis de mRNA para a TcNTPDase-1 por RT-PCR, em diferentes isolados doparasito (Dm28c- T.cruzi I; Y- T.cruzi II; 3663- T.cruzi III; 4167- T.cruzi IV; LL014-T.cruzi V; CL-14- T.cruzi VI- avirulenta), em formas não-infectantes (epimastigotas) einfectantes (tripomastigotas e amastigotas). Os ensaios de PCR em Tempo Realforam realizados com oligonucleotídeos desenhados para amplificar uma sequênciade 111pb do gene TcNTPDase-1 e, como controles endógenos, uma sequência de268pb do gene da TcCalmodulina e uma sequência de 100pb do gene TcGAPDHforam utilizados. Nós observamos que epimastigotas das cepas Y, 3663, 4167 eLL014 apresentaram os mesmos níveis de expressão do gene TcNTPDase-1 que oclone CL-14, avirulento...

ABSTRACT

Chagas disease is a neglected illness caused by the parasite protozoanTrypanosoma cruzi, which affects 6-8 million people in endemic areas of LatinAmerica. The distinct strains involved in infection, in conjunction with the regionaldistribution, have been suggested to cause different clinical manifestations andtherapeutic efficiency in Chagas Disease. The ecto-NTPDase is an apyrase locatedon the outer surface of T.cruzi plasma membrane- that hydrolyzes tri- and/or diphosphatenucleotides. Previous studies related this enzyme to the infectivity andvirulence of the parasite, and suggest an important role in the uptake of purines. Inthis study, we evaluate the mRNA levels for the ecto-NTPDase I by RT-PCR indistinct isolated parasites (Dm28c- T.cruzi I; Y- T.cruzi II; 3663- T.cruzi III; 4167-T.cruzi IV; LL014- T.cruzi V; CL-14- T.cruzi VI- avirulent), in non-infective forms(epimastigotes) and infective forms (amastigotes and trypomastigotes). The RealTime PCR assays were performed with primers designed to amplify a 111bpsequence in the TcNTPDase-1 gene and, as endogenous controls, a 268bpsequence in the TcCalmoduline gene and a 100bp sequence in the TcGAPDH genewere used. We observed that the epimastigotes of strains Y, 3663, 4167 e LL014expressed the same levels of the gene of TcNTPDase-1 that the CL-14 clone,avirulent...