Comparación de la viabilidad y crecimiento en cultivo de células madre adultas obtenidas de tejido adiposo pre y post congelamiento / Comparison of the viability and growth in stem cell culture obtained from adipose tissue (ADAS) pre and post freeze

RESUMEN

Objetivo. Comparar viabilidad, crecimiento en cultivo, fenotipo y diferenciación a linaje osteogénico de ADAS (Adipose-Derived Adult Stem Cells) pre y post congelamiento. Método. Se obtuvieron muestras de TA de individuos sanos que fueron sometidos a liposucción, con posterior digestión enzimática con Colagenasa I. La fracción vascular estromal (FVE) obtenida fue dividida equitativamente en dos fracciones una de las cuales fue criopreservada y almacenada a -196°C y la otra cultivada hasta pase uno antes de ser criopreservada. Ambas fracciones fueron criopreservadas en cámara de congelamiento automatizada utilizando dos soluciones de congelamiento: (A) Dimetilsulfóxido (DMSO)/Dextrano40/albúmina sérica humana (HSA) y (B) DMSO/HESSICO/HSA, mantenidas 3 meses a -196°C y descongeladas con buffer fosfato salino (PBS)/HSA/HESSICO. Posterior a su descongelamiento fueron sometidas a cultivo, recuento, viabilidad celular, fenotipificación y potencial osteogénico. Resultados. Las células congeladas con la solución crioprotectora DMSO/Dextrano40/HSA y con un cultivo previo al congelamiento, presentaban porcentajes de viabilidad más altos y alcanzaban confluencia del 80% en cultivo en menos tiempo. Las muestras expandidas no presentaron diferencias en el fenotipo por citometría de flujo y mostraron diferenciación a linaje osteogénico.

ABSTRACT

Objective. Comparing viability, growth in culture, phenotype and osteogenic lineage differentiation of Adipose-Derived Adult Stem Cells (ADAS) pre and post freezing. Methods. Samples were obtained from adipose tissue of healthy individuals who underwent liposuction, to which underwent enzymatic digestion with collagenase I. The stromal vascular fraction (SVF) obtained was divided equally into two fractions one of which was cryopreserved and stored at -196 °C and another cultivated to passage 1 (P1) before being cryopreserved. Both fractions were cryopreserved by chamber automated freezing using two solutions: (A) DMSO/Dextran40/HSA and (B) DMSO/HESSICO/HSA kept 3 months at -196°C and thawed in PBS/HSA/HESSICO. After its thawing were also subjected to cultivation, count, cell viability, phenotyping and osteogenic potential. Results. Found that frozen cells with cryoprotectant solution DMSO/Dextran40/HSA and a pre-freezing culture, viability percentages exhibited higher and reached 80% confluence in less time. Expanded samples showed no differences in the phenotype by flow cytometry and shown to osteogenic lineage differentiation.