Immunolocalization of morphogen sonic Hedgehog in salmon fry (Salmo salar) / Inmunolocalización del morfógeno sonic Hedhehog en alevines de salmón (Salmo salar)

ABSTRACT

With the purpose of carrying out a diagnosis of the different pathologies that affect the salmon fry stage (Salmo salar) and analyze the regeneration phases of the organizational centers and subjacent tissue in case of an amputation, we realized a study that allowed identifying the temporary and spatial location of the Sonic Hedgehog (Shh) morphogen in hatched fry stage. Fifteen salmon fry (Salmo salar) were used. They were anesthetized with 5 % benzocaine (BZ-20®, Veterquímica), fixed in 10 % buffered formalin, and embedded in paraffin, Shh polyclonal antibody (Santa Cruz H-160, rabbit) was used diluted at 1/100. They were subsequently rinsed in PBS-1 % Triton and incubated with anti-rabbit conjugated polymer antibody and HRP for 10-15 min. The development was done with DAB (Vector) for 1-5 min. The negative control was incubated without primary antibody. As an internal positive control the notochord was considered. Serial sagittal sections were analyzed consigning tissues and organs marked positively and were described morphologically. The objective of recognizing the spatial and temporal location of Shh was achieved. The notochord, spinal cord neurons and ganglia, the basal layer of the skin and also the lepidotriquias escleroblastos were positively identified for Shh. Finally positivity was also observed in the intestine and renal tubules. The heterogeneity observed in the location of the Shh morphogen suggests its potential use as a marker of regulatory centers in Salmo salar, and a potential advantage in the diagnosis of malformations of salmon fry stage, in addition to a better understanding of tissue regeneration.

RESUMEN

Con el fin de llevar a cabo un diagnóstico de las diferentes patologías que afectan a la etapa de alevín de salmón (Salmo salar) y analizar las fases de regeneración de los centros de organización y el tejido subyacente en caso de una amputación, se realizó un estudio que permitió identificar la ubicación temporal y espacial del morfógeno Sonic hedgehog (Shh) en la etapa de alevines eclosionados. Se utilizaron quince alevines de salmón (Salmo salar). Fueron anestesiados con benzocaína al 5% (BZ-20®, Veterquímica), se fijaron en formalina tamponada al 10%, e incluidos en paraplast. Se utilizó Shh anticuerpo policlonal (Santa Cruz H-160, conejo) dilución 1/100. Se enjuagaron posteriormente en PBS-1% Triton y se incubaron con anticuerpo conjugado con polímero anti-conejo y HRP durante 10-15 minutos. Se utilizó como sustrato DAB (Vector) durante 1-5 minutos. El control negativo se incubó sin anticuerpo primario. Como un control positivo interno se consideró la notocorda. Se analizaron secciones sagitales en serie consignando los tejidos y órganos marcados positivamente y se describieron morfológicamente. Se logró el objetivo de reconocer la localización espacial y temporal de Shh. La notocorda, las neuronas de la médula espinal y los ganglios, la capa basal de la piel y también los escleroblastos de las lepidotriquias fueron identificados positivamente para Shh. También se observó positivo el intestino y los túbulos renales. La heterogeneidad observada en la ubicación del morfógeno Shh sugiere su uso potencial como un marcador de los centros de regulación en Salmo salar, y una ventaja potencial en el diagnóstico de las malformaciones de la etapa de alevines de salmón, además de una mejor comprensión de la regeneración de tejidos.