Purificación de ß-galactosidasa recombinante y su evaluación como enzima marcadora en un sistema inmunoenzimático con anticuerpos monoclonales / Purification of recombinant ß-galactosidase and its evaluation as label enzyme in an immunoenzymatic assay with monoclonal antibodies

RESUMEN

La enzima ß-galactosidasa producida por vía recombinante en E. Coli fue purificada por cromatografía de intercambio iónico y filtración por gel, lográndose una preparación de enzima de más del 95 % de pureza. Su capacidad como enzima marcadora en inmunoensayo enzimático sobre fase sólida (ELISA), fue probada comparándose con peroxidasa, la cual ha sido ampliamente usada en estos ensayos. Se realizaron conjugados con anticuerpo monoclonal anti-rotavirus para un sistema de detección de rotavirus, utilizando el agente heterobifuncional SPDP. Se obtuvieron niveles similares de sensibilidad para los conjugados realizados con peroxidasa y ß-galactosidasa; igualmente no se observaron diferencias significativas en el parámetro unión específica/unión no específica. En el presente trabajo mostramos los resultados obtenidos en la purificación de la enzima, su seguimiento por actividad enzimática y su uso como enzima marcadora en inmunoensayo enzimático