Radio y enzimoinmunoensayos para el factor de crecimiento epidérmico humano con anticuerpos monoclonales de ratón / Radio and enzyme immunoassays for human epidermal growth factor with mouse monoclonal antibodies

RESUMEN

Utilizando anticuerpos monoclonales (AcM) de ratón para el factor de cecimiento epidérmico (EGF), hemos construído un radioinmunoensayo de fase sólida (RIA-FS) y dos sistemas ELISA tipo sandwich, para la cuantificación de esta molécula. El RIA-FS está basado en la adsorción del AcM CB-EGF.1 (IgG1) al poliestireno, a 20 *g/ml, y la incubación de las muestras a estudiar con el EGF radioyodado, por 3 horas, a 37-C. La sensibilidad del ensayo es de 2 ng/ml, con coeficientes de variación intra e inter ensayo por debajo de 12 %, para un amplio rango de concentraciones (límite superior de 300 ng/ml). En los ELISA se empleó este mismo AcM, conjugado con peroxidasa, como anticuerpo de revelado, y el CB-EGF.2 (IgG1) en la fase sólida. Si el antígeno y el conjugado se incuban secuencialmente, la sensibilidad del sistema es de 6 ng/ml, pero si ambos son mezclados y aplicados simultáneamente a la fase sólida activa, la sensibilidad del ensayo se incrementa hasta 400 pg/ml. El ELISA "secuencial" demostró una excelente correlación con el RIA-FS para la cuantificación de EGF humano recombinante, en muestras provenientes del proceso de producción y purificación de esta molécula. Ambos sistemas ELISA han sido ensayados en pruebas preliminares para su capacidad de detección de EGF humano en muestras de saliva y orina, arrojando valores que coinciden con datos reportados previamente en la literatura