Screening and validation of markers related to diagnosis and prognosis assessment of gastric cancer based on miRNA-mRNA network and their potential molecular mechanisms / 中国肿瘤生物治疗杂志

ABSTRACT

@#[摘 要] 目的：通过生物信息学方法探索并实验验证胃癌相关标志物miR-1-3p对胃癌细胞增殖的作用及其分子机制。方法：收集TCGA数据库中胃癌（n=375）及癌旁组织（n=45）的转录组数据，构建胃癌特异性mRNA-miRNA网络，筛选潜在的miRNA类标志物，利用TargetScan预测标志物的下游靶基因且分析它们的功能。选取人正常胃上皮细胞GES-1及胃癌细胞AGS、MKN45、NCI-N87，用qPCR法检测细胞中miR-1-3p和心肌蛋白（MYOCD）的表达，用lipofectamine 2000将miR-1-3p模拟物转染至胃癌细胞中，CCK-8法测定轨染后细胞的增殖能力，WB法测定MYOCD的表达量，双荧光素酶报告基因实验验证miR-1-3p与MYOCD之间的靶向结合关系。结果：通过数据库数据分析得到差异表达的259个miRNA和7 545个mRNA，构建胃癌特异性mRNA-miRNA调节网络，分析网络中脆弱结构后确定miR-1-3p为潜在的胃癌标志物，ROC曲线和Kaplan-Meier分析显示其对胃癌的诊断和预后评估有重要意义。细胞实验显示miR-1-3p在胃癌细胞中呈低表达（P<0.05），过表达miR-1-3p可抑制胃癌细胞AGS和MKN-45的增殖能力（P<0.05或P<0.01），且可抑制MYOCD的表达（P<0.01）。TargetScan数据库预测到MYOCD的3'UTR区域中有两个与miR-1-3p结合的位点，双荧光素酶报告基因实验证实miR-1-3p与MYOCD靶向结合且负调控MYOCD的表达（P<0.01）。结论 miR-1-3p可能是胃癌诊断和预后相关潜在的标志物，且miR-1-3p可能是通过靶向MYOCD来影响胃癌细胞的增殖。