LINC00462 regulates clear renal cell carcinoma cells sensitivity to cisplatin by affecting their glycolysis via the MYC/ABCC3 axis / 中国肿瘤生物治疗杂志

ABSTRACT

@#[摘 要] 目的：探讨LINC00462招募转录因子MYC激活ABCC3对肾透明细胞癌（ccRCC）顺铂敏感性的影响及其机制。方法：数据库分析ccRCC组织中ABCC3、MYC和LINC00462的表达及其相关性，并分析ABCC3基因的富集通路。常规培养人肾小管上皮细胞（HK-2）和ccRCC细胞（A-498、786-O和Caki-2），将si-LINC00462、oe-ABCC3、si-ABCC3、si-MYC、si-LINC00462-NC、oe-ABCC3-NC、si-ABCC3-NC和si-MYC-NC核酸序列分别转染A-498或786-O细胞，分为si-LINC00462组、si-LINC00462-NC组、oe-ABCC3组、oe-ABCC3-NC组、si-ABCC3组、si-ABCC3-NC组、si-MYC组、si-MYC-NC组；用2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）进行回复实验，构建oe-NC+PBS组、oe-ABCC3+PBS组、oe-ABCC3+2-DG组；为探究ccRCC细胞LINC00462/MYC/ABCC3轴对顺铂敏感性的影响，构建si-NC+oe-NC组、si-LINC00462+oe-NC组、si-LINC00462+oe-ABCC3组。qPCR法检测ABCC3、MYC和LINC00462在ccRCC细胞中的表达，CCK-8法检测细胞增殖活力，CCK-8法分析梯度浓度顺铂处理ccRCC细胞后IC50值，WB法检测糖酵解代谢途径相关蛋白的表达，Seahorse XP96法检测各处理组细胞的胞外酸化率（ECAR）和耗氧率（OCR），试剂盒检测细胞中丙酮酸、乳酸、ATP水平。双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀（ChIP）实验验证ABCC3与MYC间的结合关系，RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验验证LINC00462和MYC的结合关系。结果：数据库分析和qPCR实验结果显示，ABCC3在ccRCC组织和细胞中呈高表达，差异基因富集在糖酵解通路上。敲减或过表达ABCC3能够增加A-498细胞或降低786-O细胞对顺铂的敏感性，ABCC3可通过促进有氧糖酵解抑制A-498细胞对顺铂的敏感性，2-DG处理可以逆转过表达ABCC3对ccRCC细胞对顺铂敏感性的抑制作用。MYC可直接和ABCC3结合，LINC00462可招募转录因子MYC；敲低LINC00462可抑制ABCC3的表达，敲低LINC00462可抑制ccRCC细胞的有氧糖酵解，并提高其对顺铂敏感性；而进一步过表达ABCC3可逆转敲低LINC00462对ccRCC细胞有氧糖酵解的抑制作用和顺铂敏感性的提高。结论：LINC00462通过招募转录因子MYC激活ABCC3的表达促进ccRCC细胞的糖酵解，进而促进ccRCC细胞对顺铂敏感性。