Impacto funcional de pequenas mutações em Mycobacterium bovis BCG Moreau em comparação com Mycobacterium tuberculosis cepa H37Rv / Functional impact of small mutations on Mycobacterium bovis BCG Moreau compared to Mycobacterium tuberculosis strain H37Rv

RESUMO

A tuberculose continua sendo uma doença relevante no que diz respeito à saúde mundial. A doença é causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis e a única medida profilática disponível é a vacinação com BCG, uma cepa atenuada derivada de M. bovis. BCG é uma família de diferentes cepas que possuem diferenças genéticas entre si. Pequenas mutações em sequências codificantes podem causar impactos funcionais relevantes, modificando drasticamente a função/estrutura da proteína ou até alterando o nível de expressão, devido à modificação de processos de transcrição/tradução. Para melhor compreender o impacto dessa categoria de mutação na biologia do BCG, identificamos e selecionamos casos de mutação em três loci preditos de estarem envolvidos em processos biológicos importantes para micobactérias, como metabolismo redox (dodecina ­ rv1498A), metabolismo lipídico (homólogo de rv1371/2/3) e respiração anaeróbica (fumarato redutase). Essas mutações foram identificadas pela análise de genômica comparativa entre M. tuberculosis H37Rv e M. bovis BCG Moreau. Análises de RT-PCR e western blotting mostram que a transcrição e tradução desses genes não foram afetadas pelas mutações. Modelagem estrutural das proteínas mutadas indica um drástico impacto na atividade de dodecina, corroborado por nossos ensaios funcionais, diferentemente do complexo da fumarato redutase. Mutantes knockout foram criados e resultados preliminares mostram que o operon da fumarato redutase é funcional em BCG Moreau, já que o mutante frd possui um fenótipo diferencial no crescimento quando comparado com a cepa selvagem