Avaliação da esterilização a vapor do instrumental laparoscópico montado: abordagem laboratorial / Evaluation of steam sterilization of laparoscopic instruments assembled: laboratory approach

RESUMO

Esta pesquisa avaliou a segurança microbiológica da esterilização a vapor do instrumental laparoscópico reutilizável montado. Foram selecionados dois tipos de instrumental laparoscópico reutilizável trocarte e pinça de dissecção de 5mm. Considerando a eficácia da limpeza como pré-requisito essencial para o processo de esterilização, a PRIMEIRA ETAPA da pesquisa, avaliou 66 instrumentos laparoscópicos, sendo 33 pinças e 33trocartes, submetidos a diferentes métodos de limpeza, avaliando como desfecho os resíduos orgânicos de proteína, hemoglobina e carboidrato, após contaminação intencional com sangue de placenta humana. Os métodos de limpeza testados foram (1) limpeza manual com enxágue em água potável; (2) limpeza manual com enxágue em água potável, seguida de limpeza ultrassônica sem enxágue; (3) limpeza manual com enxágue em água potável, seguida de limpeza ultrassônica com enxágue em água potável e (4) limpeza manual com enxágue em água potável, seguida de limpeza ultrassônica com enxágue em água potável e último enxágue em água destilada esterilizada. Os experimentos foram acompanhados pelos grupos controle Positivo (sem limpeza) e Negativo, composto por instrumental laparoscópico novos sem contaminação intencional, avaliados após os procedimentos de limpeza (1) e (4). Para avaliação dos resíduos orgânicos, utilizou-se o kit Quantipro BCA para dosagem de proteínas, TMB One para hemoglobina, fenol 5% e ácido sulfúrico para carboidrato, todos com leitura por espectrofotometria.O grupo controle Positivo evidenciou níveis médios de 332µg/cm2 proteína, 30µg/cm2 carboidrato e 417µg/cm2 hemoglobina. Conforme esperado, o método de limpeza (4) apresentou desempenho superior quando comparado com o método (1), reduzindo 92% a mais de µg/proteína/pinça e 60% a mais de µg/carboidrato/pinça e por trocarte, embora esta superioridade não tenha sido observada de uma forma uniforme em todo o experimento. No grupo controle Negativo, os níveis máximos de proteína detectados foram 1,70µg/cm2 e de carboidrato de 1,07µg/cm2, não sendo detectada hemoglobina. A SEGUNDA ETAPA, avaliou a esterilização do instrumental laparoscópico reutilizável montado com contaminação desafio de três vezes 106 esporos Geobacillus stearothermophillus ATCC 7953, impregnados em suporte de papel filtro extraídos do indicador biológico comercialmente disponível para monitoramento da autoclavação. Os experimentos microbiológicos foram acompanhados dos grupos controle Positivo (suporte do indicador biológico não submetido à esterilização) e controle Negativo (instrumentos laparoscópicos esterilizados desmontados com contaminação desafio). Como grupo Experimental, foram analisados 370 instrumentos laparoscópicos esterilizados montados, sendo 185 pinças e 185 trocartes. Três suportes de papel impregnados com os esporos foram introduzidos no interior de cada instrumento laparoscópico, precedidos de limpeza tipo (4), embalados em papel grau cirúrgico e submetidos à esterilização a vapor saturado sob pressão (134oC por 5 minutos).Com técnica asséptica, cada suporte de papel foi inoculado em meio de cultura de Tryptic Soy Broth (TSB), incubado a 56oC por 21 dias. Não sendo observado crescimento, as amostras foram submetidas a um choque térmico a 80oC, por 20 minutos, para estimular a germinação, com reincubação por mais 72 horas. Não houve crescimento microbiano algum nas amostras do grupo Experimental. Os resultados dos grupos controles foram satisfatórios. O controle Positivo confirmou o desafio imposto aos experimentos e o controle Negativo apresentou resultados esperados de ausência de crescimento. Este estudo forneceu fortes evidências científicas para os Centros de Material e Esterilização sustentarem a segurança microbiológica da prática de esterilização do instrumental laparoscópico montado.

ABSTRACT

This study evaluated the microbiological safety of steam sterilization, the reusable laparoscopic instrument assembled. We selected two types of reusable laparoscopic instrument trocar and dissecting forceps 5mm. Considering the efficacy of cleaning as an essential prerequisite for the sterilization process, the FIRST STEP evaluated 66 laparoscopic instruments, 33 trocars and 33 dissecting forceps, subjected to different cleaning methods evaluating outcome as organic waste protein, hemoglobin and carbohydrate after intentional contamination with blood from human placenta. Cleaning methods were tested (1) manual cleaning rinse with potable water, (2) manual cleaning with rinsing in clean water, then cleaning ultrasonic without rinsing, (3) manual cleaning with rinsing in clean water, then cleaning ultrasonic rinse with potable water and (4) manual cleaning rinse with potable water, followed by ultrasonic cleaning with potable water rinse and final rinse in sterile distilled water. The experiments were accompanied by positive control groups (without cleaning) and negative, composed of laparoscopic instruments again without intentional contamination, assessed after the cleaning procedures (1) and (4). For evaluation of organic waste is used Quantipro BCA kit for the determination of protein, TMB One to hemoglobin, 5% phenol and sulfuric acid of carbohydrate with any read by spectrophotometry. The positive control group showed average levels of 332µg/cm2 protein, carbohydrate 30µg/cm2 and 417µg/cm2 hemoglobin. As expected, the cleaning method (4) superior performance when compared with the method (1), reducing 92% more µg/protein/forceps and more than 60% µg/carbohydrate/forceps and trocar, although this superiority has not been observed in a uniform manner throughout the experiment.In the negative control group maximum levels of protein detected were 1.70 µg/cm2 and 1.07 µg/cm2carbohydrate was not detected hemoglobin. The SECOND STEP evaluated the sterilization of reusable laparoscopic instruments assembled with contamination challenge 3 times 10 Geobacillusstearothermophillus spores ATCC 7953, impregnated strips filter paper extracted from commercially available biological indicator for monitoring steam sterilization. The experiments were accompanied microbiological positive control groups (biological indicator spore strips non-sterile) and negative (laparoscopic instruments sterilized contamination disassembled challenge). As experimental group were analyzed 370 laparoscopic instruments sterilized assembled, 185 dissecting forceps and 185 trocars. Three spore strips of paper impregnated were introduced in laparoscopic instrument within each preceded by cleaning type (4), packed in surgical paper and subjected to saturated steam sterilization under pressure (134oC for 5 minutes). With aseptic technique, each paper spore strip was inoculated into culture medium Tryptic Soy Broth (TSB) and incubated at 56oC for 21 days. No growth was observed, they were subjected to heat shock at 80oC for 20 minutes to stimulate germination, with more reincubation for 72 hours. There was no microbial growth in some samples of the experimental group. The results of the control groups were satisfactory. The Positive Control confirmed the challenge posed to experiments and the negative control presented results expected from the absence of growth. This study provides strong scientific evidence for the Centers for Material and Sterilization sustain the microbiological safety of the practice of sterilization of laparoscopic instruments assembled.