Susceptibilidad in vitro de cryptococcus spp a fluconazol y voriconazol por el método de difusión en agar / In vitro susceptibility of cryptococcus to fluconazole and voriconazole by disk diffusion method

RESUMEN

La criptococosis es la cuarta infección en importancia más frecuente y grave en pacientes VIH/SIDA, con una alta tasa de morbimortalidad, siendo en muchos casos de difícil resolución. El objetivo de este trabajo fue determinar la susceptibilidad in vitro de Cryptococcus spp., a fluconazol y voriconazol por el método de difusión en agar. Se recolectaron 79 aislados de Cryptococcus spp., provenientes de pacientes VIH/SIDA con impresión diagnóstica de meningitis criptocóccica desde el año 2000 hasta el 2008. Para la identificación de especie se utilizó el medio de L-canavanina-glicina-azul de bromotimol. Las pruebas de susceptibilidad se realizaron por el método de difusión con disco según el documento M44-A del CLSI y el método de difusión por E-test según el documento M27-A2 para fluconazol (FZ) y voriconazol (VZ). La lectura se realizó a las 48 y 72 horas de incubación a 35º C. Para la lectura de los discos se midió en milímetros el diámetro de la zona de inhibición que producía una reducción significativa ≥ 50% y por el método de E- test, las CMI de los azoles se interpretaron como la concentración más baja que produce una reducción sustancial de crecimiento ≥ al 50%, donde la elipse de inhibición interceptaba la escala de medición de la tira del antifúngico. Cryptococcus neoformans (83,5%) predominó sobre Cryptococcus gattii (16,5%). El porcentaje de susceptibilidad varió entre ambos métodos. Cryptococccus neoformans resultó ser mas susceptible a fluconazol que Cryptococcus gattii y ambas especies resultaron ser muy sensibles a voriconazol. El método de difusión con disco se correlacionó bien con el método de difusión E-test, pero en el primero se obtuvo una baja especificidad, por lo tanto se recomienda confirmar por métodos de concentración mínima inhibitoria aquellos aislados que muestren resultados susceptibles dosis dependientes y resistentes a fluconazol.

ABSTRACT

Cryptococcosis is the fourth largest infection more frequent and severe in patients HIV/AIDS, with a high rate of morbidity and mortality is often difficult to solve. The aim of this study was to determine in vitro antifungal susceptibility of Cryptococcus spp. to fluconazole and voriconazole by agar diffusion method. It collected 79 Cryptococcus spp. isolated from patients HIV/AIDS with diagnostic impression cryptococcal meningitis since 2000 until 2008. For the identification of species using the means of L-canavanine, glycine, bromothymol blue. The susceptibility tests were performed by disk diffusion method (M44-A CLSI) and method E-test (M27-A2) for fluconazole (FZ) and voriconazole (VZ). The reading took place between 48 to 72 hours of incubation at 35°C. To read the discs was measured in millimetres diameter of the zone of inhibition that produced a significant reduction ≥ 50%. For the E-test method according to the CLSI (M27-A2) of the WCC azoles was read as the lowest concentration where there is a substantial reduction in growth of approximately 50% where the ellipse inhibition intercepts scale strip. Cryptococcus neoformans (83.5%) predominance on Cryptococcus gattii (16.5%). The percentage of several susceptibility between the two methods. Cryptococccus neoformans proved more susceptible to fluconazole that Cryptococcus gattii both isolated and proved very susceptible to voriconazole. The disk diffusion method is well correlated with E-test but received a low specificity, therefore it is recommended that when you get dose-dependent susceptible strains and resistant isolates of this method are confirmed by minimum concentration inhibitory.