Molecular heterogeneity of Malassezia pachydermatis through RAPDPCR / Heterogeneidade molecular da Malassezia pachydermatis através de RAPD-PCR

ABSTRACT

Several methodologies in molecular biology have been used in theinvestigation of Malassezia pachydermatis and its differentiation into subtypes. Recentmolecular research of this species includes the use of samples isolated from canine otitisexterna and dermatitis, as well as from healthy animals, having in view an epidemiologicalstudy of the yeast. The aim of this study was to identify molecular differences in M.pachydermatis samples isolated from dogs with otitis externa. The M. pachydermatis strainswere analyzed by means of the Random Amplification Primer DNA - Polimerase ChainReaction (RAPD–PCR) for molecular heterogeneity research. DNA extraction was carriedout with phenol-chloroform and the RAPD technique using the AGAATCCGCC primer.A variation was observed in the number and arrangement of the bands among the 49studied isolates, grouped into nine patterns. Isolate groupings were not found to be relatedto animal breed, age or sex. It was concluded that M. pachydermatis has differences in itsmolecular profile, as shown by the molecular technique (RAPD – PCR), which allowsisolates to be classified into nine subtypes.

RESUMO

Várias metodologias em biologia molecular têm sido aplicadas para estudar aM. pachydermatis diferenciando-a em subgrupos. Recentemente utiliza-se a investigaçãomolecular desta espécie isolada de otite externa e dermatite, e também de isolados da mesmade animais hígidos, para um estudo epidemiológico da levedura. O objetivo deste trabalhofoi identificar diferenças moleculares entre isolados de M. pachydermatis obtidos de casos deotite externa canina. Para isto, amostras da levedura provenientes de cães com estaenfermidade foram estudadas através da técnica de Polimorfismo de DNA Amplificado aoAcaso - Reação da Polimerase em Cadeia (RAPD–PCR) para pesquisa de heterogeneidademolecular. A extração de DNA foi realizada no processo fenol-cloroformio e a técnica deRAPD foi estudada com o primer AGAATCCGCC. Pode-se observar com estametodologia, variação no número e posição das bandas entre os 49 isolados estudados,podendo-se agrupá-los em nove padrões. Os agrupamentos formados pelos isolados nãoapresentaram relação com raça, idade ou sexo do animal. Concluindo-se que a M.pachydermatis apresenta diferenças em seu perfil molecular, observado pela técnica molecular(RAPD-PCR) que permite classificar os isolados desta espécie em até nove subtipos.