Validación de un ensayo automatizado para determinar la actividad de cofactor de ristocetina del factor von Willebrand / Validation of an automated assay to determine activity of ristocetin cofactor of von Willebrand factor / Validação de um teste automatizado para determinar a atividade de cofator de ristocetina do fator von Willebrand

RESUMEN

La enfermedad de von Willebrand (EvW) se debe a un defecto, cuali o cuantitativo de la molécula del factor von Willebrand (VWF). Bajos niveles de VWFAg sugieren la EvW pero no distinguen los subtipos, por lo cual es necesario determinar también la funcionalidad del VWF para completar el diagnóstico. El método de referencia para estudiar la función del VWF es el ensayo del cofactor de ristocetina (VWFRCo), basado en la habilidad del VWF para inducir la aglutinación de las plaquetas en presencia de ristocetina. Recientemente se han desarrollado métodos automatizados para determinar la actividad de cofactor de ristocetina. El objetivo fue evaluar el comportamiento del ensayo inmunoturbidimétrico automatizado VWFRCo con el ensayo de actividad de VWF (VWFAct) utilizado como screening de la EvW y con el ensayo tradicional de VWFRCo por agregometría. La precisión intraensayo fue 3,1% y la precisión interensayo evaluada con el control normal fue de 3,2% mientras que con el control patológico se obtuvo un coeficiente de variación de 5,1%. Cuando se compararon los resultados de VWFAct y VWFRCo inmunoturbidimétrico en 60 pacientes, el coeficiente de correlación fue 0,96 con un bias -3,5%. En un subgrupo de 30 pacientes se comparó el VWFRco determinado por agregación y automatizada, y se obtuvo una correlación de 0,90 con un bias de 18,9%. Los valores de vWRCO obtenidos fueron, con un error total máximo permitido de 15%, estadísticamente comparables con aquellos determinados por el método VWFAct y los valores de VWFRCo obtenidos por agregometría en los pacientes estudiados.

ABSTRACT

Von Willebrand disease (VWD) is caused by a defective qualitative or quantitative von Willebrand factor (VWF) molecule. Low VWFAg suggests but does not distinguish VWD subtypes. Therefore, it is also necessary to determine the functionality of VWF to complete the diagnosis. The reference method to study VWF function is the ristocetin cofactor assay (VWFRCo) based on the VWF ability to induce platelet aggregation in the presence of ristocetin. Recently, automated methods for determining the activity of ristocetin cofactor have been developed. The aim of this study is to evaluate the performance of VWFRCo automated immunoturbidimetric assay with VWF activity assay (VWFAct ) used as a screening of VWD and the traditional VWFRCo test by aggregometry. Intra-assay precision was 3.1% and interassay precision was 3.2% in normal control and 5.1% low control When VWFAct and immunoturbidimetric VWFRCo results were compared in 60 patients, the correlation coefficient was 0.96 with a -3.5% bias. In a subset of 30 patients VWFRco was compared, determined by aggregation and in an automated manner, yielding a correlation of 0.90 with an 18.9% bias. VWORco values obtained were -with a 15% allowable total error- statistically comparable with those determined by the VWFAct method, and the VWFRCo values determined by aggregometry in the patients studied.

RESUMO

A doença de von Willebrand (DvW) ocorre devido a um defeito, qualitativo ou quantitativo da molécula do fator von Willebrand (VWF). Baixos níveis de VWFAg sugerem a EvW, mas não distinguem os subtipos, portanto é necessário determinar também a funcionalidade do VWF para completar o diagnóstico. O método de referência para estudar a função do VWF é o teste do cofator de ristocetina (VWFRCo), baseado na habilidade de VWF para induzir a aglutinação das plaquetas em presença de ristocetina. Recentemente foram desenvolvidos métodos automatizados para determinar a atividade de cofator de ristocetina. O objetivo foi avaliar o comportamento do teste imunoturbidimétrico automatizado VWFRCo com o teste de atividade de VWF (VWFAct) utilizado como screening da EvW e com o ensaio tradicional de VWFRCo por agregometria. A precisão intra-teste foi de 3,1% e a precisão inter-teste avaliada com o controle normal foi de 3,2% ao passo que com o controle patológico foi obtido um coeficiente de variação de 5,1%. Quando foram comparados os resultados de VWFAct e VWFRCo imunoturbidimétrico em 60 pacientes, o coeficiente de correlação foi de 0,96 com um Bias -3,5%. Num subgrupo de 30 pacientes se comparou o VWFRco determinado por agregação e automatizada, obtendo uma correlação de 0,90 com um bias de 18,9%. Os valores de VWFRco obtidos foram, com um erro total máximo permitido de 15%, estatisticamente comparáveis com aqueles determinados pelo método VWFAct e os valores de VWFRCo obtidos por agregometria nos pacientes estudados.